Awọn sẹẹli mononuclear ẹjẹ agbeegbe (PBMCs) ni a ṣe ilana nigbagbogbo lati yapa kuro ninu gbogbo ẹjẹ nipasẹ isọdi iwọn iwuwo.Awọn sẹẹli yẹn ni awọn lymphocytes (awọn sẹẹli T, awọn sẹẹli B, awọn sẹẹli NK) ati awọn monocytes, ti a lo nigbagbogbo ni aaye ti ajẹsara, itọju sẹẹli, arun ajakalẹ-arun ati idagbasoke ajesara.Abojuto ati itupalẹ ṣiṣeeṣe ati ifọkansi ti PBMC jẹ pataki fun awọn ile-iwosan ile-iwosan, iwadii imọ-jinlẹ iṣoogun ipilẹ ati iṣelọpọ sẹẹli ajẹsara.
Aworan 1. PBMC ti o ya sọtọ lati inu ẹjẹ titun pẹlu iwuwo iwọn didun iwuwo
AOPI Meji-fluoresces kika jẹ iru idanwo ti a lo fun wiwa ifọkansi sẹẹli ati ṣiṣeeṣe.Ojutu jẹ apapo ti osan acridine (awọ-awọ-awọ-awọ nucleic acid idoti) ati propidium iodide (pupa-fluorescent nucleic acid idoti).Propidium iodide (PI) jẹ awọ iyasoto awọ ara ti o wọ inu awọn sẹẹli nikan pẹlu awọn membran ti o gbogun, lakoko ti osan acridine ni anfani lati wọ gbogbo awọn sẹẹli ninu olugbe kan.Nigbati awọn awọ mejeeji ba wa ni arin, propidium iodide nfa idinku ninu acridine osan fluorescence nipasẹ fluorescence resonance energy transfer (FRET).Gẹgẹbi abajade, awọn sẹẹli ti a ti sọ di mimọ pẹlu awọn membran ti ko tọ di alawọ ewe Fuluorisenti ati pe a kà wọn si laaye, lakoko ti awọn sẹẹli iparun pẹlu awọn membran ti o gbogun nikan ni abawọn pupa fluorescent ati pe a ka bi okú nigba lilo eto Countstar® FL.Awọn ohun elo ti kii ṣe iparun gẹgẹbi awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, awọn platelets ati idoti ko tan imọlẹ ati pe a kọbiara si nipasẹ sọfitiwia Countstar® FL.
Ilana Idanwo:
1.Dilute awọn ayẹwo PBMC sinu 5 orisirisi awọn ifọkansi pẹlu PBS;
2.Fi 12µl AO / PI ojutu sinu ayẹwo 12µl, rọra dapọ pẹlu pipette;
3.Fa 20µl adalu sinu ifaworanhan iyẹwu;
4.Gba awọn sẹẹli laaye lati yanju ni iyẹwu fun ayika 1 iṣẹju;
5.Insect ifaworanhan sinu ohun elo Countstar FL;
6.Yan awọn ayẹwo "AO / PI Viability", lẹhinna ṣe idanwo nipasẹ Countstar FL.
Išọra: AO ati PI jẹ carcinogen ti o pọju.A ṣe iṣeduro pe oniṣẹ ẹrọ wọ ohun elo aabo ara ẹni (PPE) lati yago fun olubasọrọ taara pẹlu awọ ara ati oju.
Abajade:
1.Bright Field ati Fluorescence awọn aworan ti PBMC
Dye AO ati PI mejeeji jẹ abawọn DNA ni arin sẹẹli ti awọn sẹẹli.Nitorinaa, awọn Platelets, awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, tabi idoti cellular ko lagbara lati ni ipa lori ifọkansi PBMC ati abajade ṣiṣeeṣe.Awọn sẹẹli alãye, awọn sẹẹli ti o ku ati idoti le jẹ ipilẹ iyatọ ni irọrun lori awọn aworan ti ipilẹṣẹ nipasẹ Countstar FL (Aworan 1).
Ṣe nọmba 2. Aaye Imọlẹ ati awọn aworan Fluorescence ti PBMC
2.Concentration ati ṣiṣeeṣe ti PBMC
Awọn ayẹwo PBMC ti fomi ni awọn akoko 2, 4, 8 ati 16 pẹlu PBS, lẹhinna awọn ayẹwo wọnyẹn ti wa pẹlu idapọ awọ AO/PI ati ṣe atupale nipasẹ Countstar FL lẹsẹsẹ.Abajade ti ifọkansi ati ṣiṣeeṣe ti PBMC jẹ afihan bi eeya isalẹ:
