පර්යන්ත රුධිර ඒක න්‍යෂ්ටික සෛල (PBMCs) බොහෝ විට ඝනත්ව ශ්‍රේණියේ කේන්ද්‍රාපසාරී මගින් සම්පූර්ණ රුධිරයෙන් වෙන් කිරීමට සකසනු ලැබේ.එම සෛල ලිම්ෆොසයිට් (ටී සෛල, බී සෛල, එන්කේ සෛල) සහ මොනොසයිට් වලින් සමන්විත වන අතර ඒවා ප්‍රතිශක්තිකරණ, සෛල ප්‍රතිකාර, බෝවන රෝග සහ එන්නත් සංවර්ධනය යන ක්ෂේත්‍රවල බහුලව භාවිතා වේ.සායනික රසායනාගාර, මූලික වෛද්‍ය විද්‍යා පර්යේෂණ සහ ප්‍රතිශක්තිකරණ සෛල නිෂ්පාදනය සඳහා PBMC හි ශක්යතාව සහ සාන්ද්රණය නිරීක්ෂණය කිරීම සහ විශ්ලේෂණය කිරීම ඉතා වැදගත් වේ.
Figure 1. ඝනත්ව ශ්‍රේණියේ කේන්ද්‍රාපසාරී සමඟ නැවුම් රුධිරයෙන් හුදකලා වූ PBMC
AOPI ද්විත්ව ප්‍රතිදීප්ත ගණනය කිරීම යනු සෛල සාන්ද්රණය සහ ශක්යතාව හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන විශ්ලේෂණ වර්ගයයි.විසඳුම ඇක්‍රිඩින් තැඹිලි (කොළ-ප්‍රතිදීප්ත න්‍යෂ්ටික අම්ල පැල්ලම) සහ ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් (රතු-ප්‍රතිදීප්ත න්‍යෂ්ටික අම්ල පැල්ලම) සංයෝගයකි.ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් (PI) යනු පටල බැහැර කිරීමේ ඩයි වර්ගයක් වන අතර එය සම්මුතිගත පටල සහිත සෛලවලට පමණක් ඇතුළු වන අතර ඇක්‍රිඩීන් තැඹිලිවලට ජනගහනයක සියලුම සෛල විනිවිද යාමට හැකි වේ.සායම් දෙකම න්‍යෂ්ටිය තුළ පවතින විට, ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් ප්‍රතිදීප්ත අනුනාද ශක්ති හුවමාරුව (FRET) මගින් ඇක්‍රයිඩින් තැඹිලි ප්‍රතිදීප්තියේ අඩුවීමක් ඇති කරයි.එහි ප්‍රතිඵලයක් වශයෙන්, නොනැසී පවතින පටල සහිත න්‍යෂ්ටික සෛල ප්‍රතිදීප්ත කොළ පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර සජීවී ලෙස ගණන් ගනු ලැබේ, නමුත් සම්මුතිගත පටල සහිත න්‍යෂ්ටික සෛල ප්‍රතිදීප්ත රතු පැහැයෙන් පමණක් වර්ණාලේප කරන අතර Countstar® FL පද්ධතිය භාවිතා කරන විට මිය ගිය ලෙස ගණන් ගනු ලැබේ.රතු රුධිර සෛල, පට්ටිකා සහ සුන්බුන් වැනි න්‍යෂ්ටික නොවන ද්‍රව්‍ය ප්‍රතිදීප්ත නොවන අතර Countstar® FL මෘදුකාංගය මගින් නොසලකා හරිනු ලැබේ.
පර්යේෂණාත්මක ක්රියා පටිපාටිය:
1. PBMC නියැදිය PBS සමඟ විවිධ සාන්ද්‍රණ 5කට තනුක කරන්න;
2.12µl නියැදියකට 12µl AO/PI ද්‍රාවණය එකතු කරන්න, පයිපෙට් සමග මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කරන්න;
3.20µl මිශ්‍රණය කුටීර ස්ලයිඩයට අදින්න;
4. සෛල විනාඩි 1 ක් පමණ කුටියේ පදිංචි වීමට ඉඩ දෙන්න;
5. කවුන්ට්ස්ටාර් එෆ්එල් උපකරණයට ස්ලයිඩය කෘමි කරන්න;
6. "AO/PI ශක්‍යතා" විශ්ලේෂණය තෝරන්න, ඉන්පසු Countstar FL මගින් පරීක්ෂා කරන්න.
අවවාදයයි: AO සහ PI යනු විභව පිළිකා කාරකයකි.සම සහ ඇස් සමඟ සෘජුව සම්බන්ධ වීම වැළැක්වීම සඳහා ක්‍රියාකරු පුද්ගලික ආරක්ෂක උපකරණ (PPE) පැළඳීම නිර්දේශ කෙරේ.
ප්‍රතිඵලය:
1.PBMC හි දීප්තිමත් ක්ෂේත්‍ර සහ ප්‍රතිදීප්ත රූප
AO සහ PI ඩයි යන දෙකම සෛලවල සෛල න්‍යෂ්ටියේ පැල්ලම් DNA වේ.එබැවින්, පට්ටිකා, රතු රුධිර සෛල හෝ සෛලීය සුන්බුන් PBMCs සාන්ද්‍රණයට සහ ශක්‍යතා ප්‍රතිඵලයට බලපෑම් කළ නොහැක.සජීවී සෛල, මිය ගිය සෛල සහ සුන්බුන් Countstar FL මගින් ජනනය කරන ලද රූප මත පදනම්ව පහසුවෙන් වෙන්කර හඳුනාගත හැකිය (රූපය 1).
රූපය 2.PBMC හි දීප්තිමත් ක්ෂේත්‍ර සහ ප්‍රතිදීප්ත රූප
2. PBMC හි සාන්ද්රණය සහ ශක්යතාව
PBMC සාම්පල PBS සමඟ 2, 4, 8 සහ 16 වාරයක් තනුක කර ඇති අතර, එම සාම්පල AO/PI ඩයි මිශ්‍රණයකින් පුර්වගත කර පිළිවෙලින් Countstar FL මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.PBMC හි සාන්ද්රණය සහ ශක්‍යතාවයේ ප්‍රතිඵලය පහත රූපයේ දැක්වේ.
