Selil mononikleyè san periferik (PBMC) yo souvan trete pou separe ak san antye pa santrifujasyon gradyan dansite.Selil sa yo konpoze de lenfosit (selil T, selil B, selil NK) ak monosit, souvan itilize nan domèn iminoloji, terapi selilè, maladi enfeksyon ak devlopman vaksen.Siveyans ak analiz viabilite ak konsantrasyon PBMC enpòtan anpil pou laboratwa klinik yo, rechèch debaz syans medikal ak pwodiksyon selil iminitè yo.
Fig 1. PBMC izole nan san fre ak santrifujasyon gradyan Dansite
AOPI Dual-fluoresces konte se kalite tès yo itilize pou detekte konsantrasyon selil ak viabilite.Solisyon an se konbinezon akridin zoranj (vèt-fluoresan tach asid nikleyik) ak yodid propidium (wouj-fluoresan tach asid nikleyik).Propidium yodide (PI) se yon lank eksklizyon manbràn ki antre sèlman nan selil ki gen manbràn konpwomèt, pandan y ap akridin zoranj kapab antre nan tout selil nan yon popilasyon.Lè tou de koloran yo prezan nan nwayo a, yodid propidium lakòz yon rediksyon nan fluoresans akridin zoranj pa transfè enèji sonorite fluoresans (FRET).Kòm yon rezilta, selil nwayo ki gen manbràn entak tach fliyoresan vèt epi yo konte kòm vivan, tandiske selil nwayo ak manbràn konpwomèt sèlman tach fluoresan wouj epi yo konte kòm mouri lè w ap itilize sistèm Countstar® FL.Materyèl ki pa nwayo tankou globil wouj, plakèt ak debri pa fliyoresan epi lojisyèl Countstar® FL a inyore.
Pwosedi eksperimantal:
1.Dilye echantiyon PBMC a nan 5 konsantrasyon diferan ak PBS;
2.Ajoute 12µl solisyon AO/PI nan echantiyon 12µl, dousman melanje ak pipèt;
3.Draw 20µl melanj nan glise chanm;
4.Pèmèt selil yo rezoud nan chanm lan pou apeprè 1 minit;
5.Ensèk glise a nan enstriman Countstar FL;
6.Chwazi tès "AO/PI Viability" an, epi teste pa Countstar FL.
Atansyon: AO ak PI se yon potansyèl kanserojèn.Li rekòmande pou operatè a mete ekipman pwoteksyon pèsonèl (PPE) pou evite kontak dirèkteman ak po ak je.
Rezilta:
1.Klere jaden ak imaj Fluoresans nan PBMC la
Lank AO ak PI yo tou de tach ADN nan nwayo selil selil yo.Se poutèt sa, Plakèt, globil wouj, oswa debri selilè yo pa kapab afekte konsantrasyon PBMC yo ak rezilta viabilite.Selil vivan, selil mouri ak debri yo ka fasilman distenge baz sou imaj Countstar FL ki te pwodwi (Figi 1).
Figi 2．Zen klere ak imaj Fluoresans nan PBMC a
2.Konsantrasyon ak Viabilite PBMC
Echantiyon PBMC yo te dilye nan 2, 4, 8 ak 16 fwa ak PBS, Lè sa a, echantiyon sa yo te enkube ak yon melanj lank AO/PI ak analize pa Countstar FL respektivman.Rezilta konsantrasyon ak viabilite PBMC montre jan pi ba a:
