పెరిఫెరల్ బ్లడ్ మోనోన్యూక్లియర్ సెల్స్ (PBMCలు) డెన్సిటీ గ్రేడియంట్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా మొత్తం రక్తం నుండి వేరు చేయడానికి తరచుగా ప్రాసెస్ చేయబడతాయి.ఆ కణాలు లింఫోసైట్‌లు (T కణాలు, B కణాలు, NK కణాలు) మరియు మోనోసైట్‌లను కలిగి ఉంటాయి, వీటిని సాధారణంగా ఇమ్యునాలజీ, సెల్ థెరపీ, ఇన్ఫెక్షియస్ డిసీజ్ మరియు వ్యాక్సిన్ డెవలప్‌మెంట్ రంగంలో ఉపయోగిస్తారు.క్లినికల్ లాబొరేటరీలు, ప్రాథమిక వైద్య శాస్త్ర పరిశోధన మరియు రోగనిరోధక కణాల ఉత్పత్తికి PBMC యొక్క సాధ్యత మరియు ఏకాగ్రతను పర్యవేక్షించడం మరియు విశ్లేషించడం చాలా కీలకం.
అత్తి 1. డెన్సిటీ గ్రేడియంట్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్‌తో తాజా రక్తం నుండి వేరుచేయబడిన PBMC
AOPI డ్యూయల్-ఫ్లోరోసెస్ లెక్కింపు అనేది సెల్ ఏకాగ్రత మరియు సాధ్యతను గుర్తించడానికి ఉపయోగించే పరీక్ష రకం.పరిష్కారం అక్రిడిన్ ఆరెంజ్ (ఆకుపచ్చ-ఫ్లోరోసెంట్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ స్టెయిన్) మరియు ప్రొపిడియం అయోడైడ్ (ఎరుపు-ఫ్లోరోసెంట్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ స్టెయిన్) కలయిక.ప్రొపిడియం అయోడైడ్ (PI) అనేది పొర మినహాయింపు రంగు, ఇది రాజీపడిన పొరలతో కణాలలోకి మాత్రమే ప్రవేశిస్తుంది, అయితే యాక్రిడిన్ ఆరెంజ్ జనాభాలోని అన్ని కణాలలోకి చొచ్చుకుపోతుంది.న్యూక్లియస్‌లో రెండు రంగులు ఉన్నప్పుడు, ప్రొపిడియం అయోడైడ్ ఫ్లోరోసెన్స్ రెసొనెన్స్ ఎనర్జీ ట్రాన్స్‌ఫర్ (FRET) ద్వారా యాక్రిడిన్ ఆరెంజ్ ఫ్లోరోసెన్స్‌లో తగ్గింపును కలిగిస్తుంది.ఫలితంగా, చెక్కుచెదరని పొరలతో కూడిన న్యూక్లియేటెడ్ కణాలు ఫ్లోరోసెంట్ ఆకుపచ్చ రంగులో ఉంటాయి మరియు ప్రత్యక్షంగా లెక్కించబడతాయి, అయితే కాంప్రమైజ్డ్ మెంబ్రేన్‌లతో న్యూక్లియేటెడ్ కణాలు ఫ్లోరోసెంట్ ఎరుపు రంగును మాత్రమే మరక చేస్తాయి మరియు కౌంట్‌స్టార్ ® FL వ్యవస్థను ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు చనిపోయినట్లు లెక్కించబడతాయి.ఎర్ర రక్త కణాలు, ప్లేట్‌లెట్‌లు మరియు శిధిలాల వంటి న్యూక్లియేటెడ్ కాని పదార్థం ఫ్లోరోస్ చేయదు మరియు Countstar® FL సాఫ్ట్‌వేర్ ద్వారా విస్మరించబడుతుంది.
ప్రయోగాత్మక విధానం:
1.PBMC నమూనాను PBSతో 5 విభిన్న సాంద్రతలుగా పలుచన చేయండి;
2.12µl నమూనాలో 12µl AO/PI ద్రావణాన్ని జోడించి, పైపెట్‌తో శాంతముగా కలపాలి;
3.20µl మిశ్రమాన్ని ఛాంబర్ స్లయిడ్‌లోకి గీయండి;
4. కణాలను దాదాపు 1 నిమిషం పాటు చాంబర్‌లో ఉంచడానికి అనుమతించండి;
5. కౌంట్‌స్టార్ FL ఇన్‌స్ట్రుమెంట్‌లోకి స్లయిడ్‌ను క్రిమిసంహారక చేయండి;
6. “AO/PI వయబిలిటీ” పరీక్షను ఎంచుకోండి, ఆపై Countstar FL ద్వారా పరీక్షించండి.
హెచ్చరిక: AO మరియు PI ఒక సంభావ్య క్యాన్సర్.చర్మం మరియు కళ్ళతో నేరుగా సంబంధాన్ని నివారించడానికి ఆపరేటర్ వ్యక్తిగత రక్షణ పరికరాలను (PPE) ధరించాలని సిఫార్సు చేయబడింది.
ఫలితం:
1.PBMC యొక్క బ్రైట్ ఫీల్డ్ మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ చిత్రాలు
AO మరియు PI రంగు రెండూ కణాల కణ కేంద్రకంలో DNA మరకలు.అందువల్ల, ప్లేట్‌లెట్‌లు, ఎర్ర రక్త కణాలు లేదా సెల్యులార్ శిధిలాలు PBMCల ఏకాగ్రత మరియు సాధ్యత ఫలితాన్ని ప్రభావితం చేయలేవు.కౌంట్‌స్టార్ FL (మూర్తి 1) ద్వారా రూపొందించబడిన చిత్రాల ఆధారంగా జీవించే కణాలు, చనిపోయిన కణాలు మరియు శిధిలాలు సులభంగా గుర్తించబడతాయి.
మూర్తి 2.PBMC యొక్క బ్రైట్ ఫీల్డ్ మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ చిత్రాలు
2.PBMC యొక్క ఏకాగ్రత మరియు సాధ్యత
PBMC నమూనాలను PBSతో 2, 4, 8 మరియు 16 సార్లు కరిగించారు, ఆ నమూనాలను AO/PI డై మిశ్రమంతో పొదిగించి, వరుసగా Countstar FL ద్వారా విశ్లేషించారు.PBMC యొక్క ఏకాగ్రత మరియు సాధ్యత యొక్క ఫలితం క్రింది చిత్రంలో చూపబడింది:
