Bidh ceallan mononuclear fala iomaill (PBMCs) gu tric air an giullachd gus dealachadh bho fhuil slàn le bhith a’ toirt a-steach caisead dùmhlachd.Tha na ceallan sin air an dèanamh suas de lymphocytes (ceallan T, ceallan B, ceallan NK) agus monocytes, a thathas a’ cleachdadh gu cumanta ann an raon imdhun-eòlas, leigheas cealla, galair gabhaltach agus leasachadh banachdach.Tha sgrùdadh agus sgrùdadh air comasachd agus dùmhlachd PBMC deatamach airson deuchainn-lannan clionaigeach, sgrùdadh saidheans meidigeach bunaiteach agus cinneasachadh cealla dìon.
Fig 1. PBMC iomallach bho fhuil ùr le centrifugation caisead dùmhlachd
Is e cunntadh dà-fluoresces AOPI an seòrsa assay a thathas a’ cleachdadh gus dùmhlachd cealla agus comasachd a lorg.Is e am fuasgladh measgachadh de acridine orange (an stain searbhag niuclasach uaine-fluorescent) agus propidium iodide (an stain searbhag niuclasach dearg-fluorescent).Is e dath às-dùnadh membran a th’ ann am Propidium iodide (PI) a bhios a’ dol a-steach do cheallan le buill-bodhaig a-mhàin, fhad ‘s a tha acridine orange comasach air a dhol a-steach do gach cealla ann an sluagh.Nuair a tha an dà dhath an làthair anns an niuclas, bidh propidium iodide ag adhbhrachadh lùghdachadh ann an fluorescence orains acridine le gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence (FRET).Mar thoradh air an sin, bidh ceallan nucleated le buill-bodhaig slàn a’ stain uaine flùraiseach agus tha iad air an cunntadh mar dhaoine beò, ach chan eil ceallan nucleated le buill-bodhaig cuibhrichte ach a’ staineadh dearg flùraiseach agus air an cunntadh mar marbh nuair a bhios iad a’ cleachdadh siostam Countstar® FL.Cha bhith stuthan neo-niùclaichte leithid ceallan fala dearga, truinnsearan agus sprùilleach a’ sruthadh a-steach agus tha bathar-bog Countstar® FL a’ toirt aire dhaibh.
Modh-obrach deuchainneach:
1.Dilute an sampall PBMC gu 5 diofar cho-chruinneachaidhean le PBS;
2.Cuir fuasgladh 12µl AO/PI ann an sampall 12µl, measgachadh gu socair le pìob;
3.Tarraing measgachadh 20µl a-steach do shleamhnag seòmar;
4.Leig leis na ceallan socrachadh san t-seòmar airson timcheall air 1 mionaid;
5.Insect an sleamhnag a-steach gu inneal Countstar FL;
6.Tagh an assay “AO/PI Viability”, an uairsin dèan deuchainn le Countstar FL.
Rabhadh: Tha AO agus PI nan carcinogen a dh’fhaodadh a bhith ann.Thathas a’ moladh gum bi an gnìomhaiche a’ caitheamh uidheamachd dìon pearsanta (PPE) gus conaltradh dìreach le craiceann is sùilean a sheachnadh.
Toradh:
Ìomhaighean 1.Bright Field agus fluorescence den PBMC
Tha an dath AO agus PI le chèile nan stains DNA ann an niuclas cealla nan ceallan.Mar sin, chan urrainn dha platelets, ceallan fala dearga, no sprùilleach cealla buaidh a thoirt air toradh dùmhlachd agus ion-obrachadh PBMC.Faodar ceallan beò, ceallan marbh agus sprùilleach a chomharrachadh gu furasta stèidhichte air na h-ìomhaighean a chruthaich Countstar FL (Figear 1).
Figear 2. Ìomhaighean Bright Field agus fluorescence den PBMC
2.Concentration agus Viability PBMC
Chaidh na sampallan PBMC a lagachadh ann an amannan 2, 4, 8 agus 16 le PBS, an uairsin chaidh na sampallan sin a thoirt a-steach le measgachadh dath AO / PI agus chaidh an sgrùdadh le Countstar FL fa leth.Tha toradh dùmhlachd agus ion-obrachadh PBMC air a shealltainn mar a chithear gu h-ìosal:
