Ny sela mononuklear periferika (PBMCs) dia matetika nokarakaraina mba hisaraka amin'ny ra manontolo amin'ny alàlan'ny centrifugation gradient.Ireo sela ireo dia misy lymphocytes (sela T, sela B, sela NK) ary monocytes, izay matetika ampiasaina amin'ny sehatry ny immunology, fitsaboana sela, areti-mifindra ary fampandrosoana ny vaksiny.Ny fanaraha-maso sy ny famakafakana ny mahavelona sy ny fifantohana amin'ny PBMC dia zava-dehibe ho an'ny laboratoara klinika, fikarohana ara-tsiansa ara-pitsaboana fototra ary ny famokarana sela immune.
Sary 1. PBMC mitoka-monina avy amin'ny ra vaovao miaraka amin'ny centrifugation gradient Density
Ny fanisana AOPI Dual-fluoresces dia ny karazana assay ampiasaina amin'ny fitiliana ny fifantohana sy ny fahaveloman'ny sela.Ny vahaolana dia fitambaran'ny acridine orange (ny tasy amin'ny asidra nokleika maitso maitso) sy ny propidium iodide (ny tasy amin'ny asidra nukleika mena-fluorescent).Ny propidium iodide (PI) dia loko manilika amin'ny membrane izay miditra ao amin'ny sela misy membranes simba fotsiny, fa ny acridine orange dia afaka miditra amin'ny sela rehetra amin'ny mponina iray.Rehefa misy loko roa ao amin'ny nucleus, ny propidium iodide dia miteraka fampihenana ny fluorescence orange acridine amin'ny alàlan'ny famindrana angovo azo avy amin'ny fluorescence resonance (FRET).Vokatr'izany, ny sela nokleary miaraka amin'ny fonon-tsela tsy misy loto dia mandoto maitso maitso ary isaina ho velona, fa ny sela nokleary miaraka amin'ny membrane simba dia mandoto mena fluorescent ary isaina ho maty rehefa mampiasa ny rafitra Countstar® FL.Ny fitaovana tsy misy nokleary toy ny sela mena, ny platelets ary ny potipoti-javatra dia tsy fluoresce ary tsy noraharahian'ny rindrambaiko Countstar® FL.
Fomba fanandramana:
1. Manalefaka ny santionany PBMC amin'ny fifantohana 5 samihafa miaraka amin'ny PBS;
2. Ampio vahaolana 12µl AO/PI amin'ny santionany 12µl, mifangaro moramora amin'ny pipette;
3. Manaova fangaro 20µl ho ao anaty efitrano fitetezana;
4. Avelao hipetraka ao anaty efitrano mandritra ny 1 minitra ny sela;
5. Ampidiro ao amin'ny fitaovana Countstar FL ny slide;
6. Fidio ny “AO/PI Viability” assay, avy eo andramana amin'ny Countstar FL.
Fampitandremana: Ny AO sy PI dia mety ho carcinogen.Amporisihina ny mpampiasa hanao fitaovana fiarovana manokana (PPE) mba hisorohana ny fifandraisana mivantana amin'ny hoditra sy ny maso.
Vokatra:
1. Sarin'ny saha mamirapiratra sy ny fluorescence an'ny PBMC
Ny loko AO sy PI dia samy mandoko ny ADN ao amin'ny nucleus cellule.Noho izany, ny platelets, ny sela mena, na ny potipoti-javatra amin'ny sela dia tsy afaka miantraika amin'ny fifantohan'ny PBMC sy ny vokatra azo.Ny sela velona, ny sela maty ary ny potipoti-javatra dia azo avahana mora foana amin'ny sary novokarin'ny Countstar FL (sary 1).
Sary 2. Sarin'ny saha mamirapiratra sy ny fluorescence amin'ny PBMC
2. Ny fifantohana sy ny fahaveloman'ny PBMC
Ny santionan'ny PBMC dia nopotehina tamin'ny in-2, 4, 8 ary 16 miaraka amin'ny PBS, avy eo ireo santionany ireo dia natsipy tamin'ny fangaro loko AO / PI ary nodinihin'ny Countstar FL tsirairay avy.Ny vokatry ny fifantohana sy ny viability ny PBMC dia aseho amin'ny sary eto ambany:
