د پیریفیرل وینې مونو نیوکلیر حجرې (PBMCs) ډیری وختونه پروسس کیږي ترڅو د کثافت تدریجي سینټرفیوګیشن په واسطه له ټولې وینې څخه جلا شي.دا حجرې د لیمفوسایټس (T حجرې، B حجرې، NK حجرې) او مونوسایټس څخه جوړ شوي دي، چې معمولا د معافیت، حجرو درملنه، د ساري ناروغۍ او واکسین پراختیا کې کارول کیږي.د PBMC د وړتیا او غلظت څارنه او تحلیل د کلینیکي لابراتوارونو، لومړني طبي ساینس څیړنې او د معافیت حجرو تولید لپاره خورا مهم دي.
شکل 1. PBMC د کثافت تدریجي سینټرفیوګریشن سره د تازه وینې څخه جلا شوی
د AOPI دوه ګونی فلوروسیس شمیرنه د ارزونې ډول دی چې د حجرو غلظت او وړتیا معلومولو لپاره کارول کیږي.محلول د اکریډین نارنج (د شین فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ) او پروپیډیم آیوډیډ (د سور فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ) ترکیب دی.پروپیډیم آیوډیډ (PI) د غشا جلا کولو رنګ دی چې یوازې د جوړ شوي جھلی سره حجرو ته ننوځي، پداسې حال کې چې اکریډین نارنجي د دې توان لري چې په نفوس کې ټولو حجرو ته ننوځي.کله چې دواړه رنګونه په نیوکلیوس کې شتون ولري، پروپیډیم آیوډیډ د فلوروسینس ریزونانس انرژی لیږد (FRET) په واسطه د اکریډین نارنجي فلوروسینس د کمښت لامل کیږي.د پایلې په توګه، نیوکلیټ شوي حجرې چې د پاتې غشا سره د فلوروسینټ شنه رنګ لري او ژوندی شمیرل کیږي، پداسې حال کې چې د جوړ شوي غشا سره نیوکلیټ شوي حجرې یوازې د فلوروسینټ سور رنګ کوي او د Countstar® FL سیسټم کارولو په وخت کې مړ شوي شمیرل کیږي.غیر نیوکلیټ شوي مواد لکه د وینې سره حجرې، پلیټلیټ او کثافات فلوریس نه کوي او د Countstar® FL سافټویر لخوا له پامه غورځول کیږي.
تجربوي کړنلاره:
1. د PBMC نمونه د PBS سره په 5 مختلف غلظت کې ضعیف کړئ؛
2. په 12µl نمونه کې 12µl AO/PI محلول اضافه کړئ، په نرمۍ سره د پایپټ سره مخلوط کړئ؛
3. 20µl مخلوط د چیمبر سلایډ کې رسم کړئ؛
4. حجرو ته اجازه ورکړئ چې شاوخوا 1 دقیقې لپاره په چیمبر کې ځای پرځای شي؛
5. سلایډ د Countstar FL وسیلې کې حشره کړئ؛
6. د "AO/PI وړتیا" ارزونه غوره کړئ، بیا د Countstar FL لخوا ازموینه وکړئ.
احتیاط: AO او PI یو احتمالي سرطان دی.دا سپارښتنه کیږي چې چلونکي شخصي محافظتي تجهیزات (PPE) واغوندي ترڅو د پوستکي او سترګو سره مستقیم تماس څخه مخنیوی وشي.
پایله:
1. د PBMC روښانه ساحه او فلوروسینس انځورونه
AO او PI رنګ دواړه د حجرو په هسته کې د DNA داغونه دي.له همدې امله، پلیټلیټونه، د وینې سره حجرې، یا د حجرو کثافات نشي کولی د PBMCs غلظت او د وړتیا پایلې اغیزه وکړي.ژوندي حجرې، مړې حجرې او کثافات په اسانۍ سره د کاونټسټار FL لخوا رامینځته شوي عکسونو پراساس توپیر کیدی شي (شکل 1).
شکل 2. د PBMC روښانه ساحه او د فلوروسینس انځورونه
2. د PBMC غلظت او وړتیا
د PBMC نمونې په 2، 4، 8 او 16 وختونو کې د PBS سره ضعیف شوي، بیا دا نمونې د AO/PI رنګ مخلوط سره مینځل شوي او په ترتیب سره د Countstar FL لخوا تحلیل شوي.د PBMC غلظت او وړتیا پایله په لاندې شکل کې ښودل شوي:
