Is minic a phróiseáiltear cealla aonnúicléacha fola forimeallacha (PBMCanna) chun scaradh ó lánfhola trí lártheifneoiriú grádán dlúis.Tá na cealla sin comhdhéanta de limficítí (cealla T, cealla B, cealla NK) agus monocytes, a úsáidtear go coitianta i réimse na himdhíoneolaíochta, teiripe na gceall, galair thógálacha agus forbairt vacsaíní.Tá sé ríthábhachtach monatóireacht agus anailís a dhéanamh ar inmharthanacht agus tiúchan PBMC do na saotharlanna cliniciúla, do thaighde bunúsach na heolaíochta leighis agus do tháirgeadh cealla imdhíonachta.
Fíor 1. PBMC scoite ó fhuil úr le lártheifneoiriú grádán Dlús
Is é comhaireamh défhluaraisí AOPI an cineál measúnaithe a úsáidtear chun tiúchan agus inmharthanacht cille a bhrath.Is é an tuaslagán meascán d'oráiste acridine (an stain aigéad núicléach glas-fluaraiseacha) agus iaidíd próipidiam (an stain aigéid núicléacha dearg-fhluaraiseacha).Is dath eisiamh membrane é iaidíd própidiam (PI) nach dtéann isteach ach i gcealla le seicní comhréiteach, agus is féidir le oráiste aicridín dul isteach i ngach cealla sa daonra.Nuair a bhíonn an dá ruaim i láthair sa núicléas, bíonn iaidíd propidium ina chúis le laghdú ar fhluaraiseacht oráiste acridine trí aistriú fuinnimh athshondais fhluaraiseachta (FRET).Mar thoradh air sin, stainníonn cealla núiclithe le seicní slána glas fluaraiseacha agus áireofar iad mar bheocht, ach ní stainnítear ach dearg fluaraiseacha i gcealla núiclithe le seicní comhréiteach agus áireofar go bhfuil siad marbh nuair a bhíonn córas Countstar® FL in úsáid.Ní fhluaraisíonn ábhar neamhnúicléach amhail cealla fola dearga, pláitíní agus smionagar agus ní dhéanann bogearraí Countstar® FL neamhaird orthu.
Nós Imeachta Turgnamhach:
1.Dilute an sampla PBMC i 5 tiúchan éagsúla le PBS;
2.Cuir tuaslagán 12µl AO/PI isteach i sampla 12µl, measctha go réidh le pípéad;
3.Tarraing meascán 20µl isteach i sleamhnán cuais;
4. Lig do na cealla socrú síos sa seomra ar feadh thart ar 1 nóiméad;
5.Insect an sleamhnán isteach ionstraim Countstar FL;
6.Roghnaigh an measúnú “Inmharthanacht AO/PI”, ansin déan tástáil le Countstar FL.
Aire: Is carcanaigin ionchasach iad AO agus PI.Moltar don oibreoir trealamh cosanta pearsanta (PPE) a chaitheamh chun teagmháil dhíreach leis an gcraiceann agus leis na súile a sheachaint.
Toradh:
Íomhánna 1.Bright Field agus Fluaraiseacht an PBMC
Is stains DNA iad an dath AO agus PI i núicléas cille na gcealla.Mar sin, níl Pláitíní, cealla fola dearga, nó smionagar ceallacha in ann tionchar a imirt ar thiúchan PBMC agus ar thoradh inmharthanachta.Is féidir cealla beo, cealla marbha agus smionagar a idirdhealú go héasca bunaithe ar na híomhánna a ghineann Countstar FL (Fíor 1).
Fíor 2.Íomhánna Geala Réimse agus Fluaraiseachta den PBMC
2.Tiúchan agus Inmharthanacht PBMC
Caolaíodh na samplaí PBMC in 2, 4, 8 agus 16 huaire le PBS, ansin goradh na samplaí sin le meascán dath AO/PI agus rinne Countstar FL anailís orthu faoi seach.Léirítear toradh tiúchan agus inmharthanacht PBMC mar atá thíos:
