Eksperimentalni protokol
% citotoksičnosti se izračuna po spodnji enačbi.
Citotoksičnost % = (Živo število kontrol – Živo število zdravljenih) / Živo število kontrol × 100
Z označevanjem ciljnih tumorskih celic z netoksičnim, neradioaktivnim kalceinom AM ali transfektiranjem z GFP lahko spremljamo ubijanje tumorskih celic s celicami CAR-T.Medtem ko bodo žive ciljne rakave celice označene z zelenim kalceinom AM ali GFP, mrtve celice ne morejo zadržati zelenega barvila.Hoechst 33342 se uporablja za obarvanje vseh celic (tako T celic kot tumorskih celic), ali pa se lahko ciljne tumorske celice obarvajo z membransko vezanim kalceinom AM, PI se uporablja za obarvanje mrtvih celic (tako T celic kot tumorskih celic).Ta strategija obarvanja omogoča razlikovanje različnih celic.
Citotoksičnost K562, odvisna od razmerja E: T
Primer fluorescenčne slike Hoechst 33342, CFSE, PI so ciljne celice K562 pri t = 3 ure
Nastale fluorescenčne slike so pokazale povečanje Hoechst+CFSE+PI+ ciljnih celic, ko se je povečalo razmerje E:T
