Vzorec, ki vsebuje celice v suspenziji, se zmeša s Trypan modrim barvilom, nato pa potegne v diapozitiv Countstar Chamber, ki ga analizira Countstar Automated Cell Counter.Countstarjevi instrumenti, ki temeljijo na klasičnem principu štetja tripan modrih celic, integrirajo napredno tehnologijo optičnega slikanja, inteligentno tehnologijo za prepoznavanje slik in zmogljive programske algoritme, ki ne zagotavljajo le koncentracije in sposobnosti preživetja celic, temveč zagotavljajo tudi informacije o koncentraciji celic, sposobnosti preživetja, stopnji agregacije, okroglosti. in porazdelitev premera samo z enim zagonom.
Agregirana celična analiza
Slika 3 Štetje združenih celic.
A. Slika vzorca celice;
B. Slika vzorca celice z identifikacijsko oznako programske opreme Countstar BioTech.(Zeleni krog: živa celica, rumeni krog: mrtva celica, rdeči krog: združena celica).
C. Agregirani histogram
Nekatere primarne celice ali celice subkulture so nagnjene k združevanju v slabem stanju kulture ali pretirani prebavi, kar povzroča velike težave pri štetju celic.S funkcijo kalibracije agregacije lahko Countstar izvede stimulacijski izračun agregacije, da zagotovi natančno štetje celic in pridobi stopnjo agregacije in histogram agregacije, s čimer zagotovi osnovo za eksperimentatorje za presojo stanja celic.
Spremljanje rasti celic
Slika 4. krivulja rasti celic.
Krivulja rasti celic je običajna metoda za merjenje absolutne rasti števila celic, pomemben kazalnik za določanje koncentracije celic in eden od osnovnih parametrov za kulturo osnovnih bioloških lastnosti celic.Da bi natančno opisali dinamično spremembo števila celic skozi celoten proces, lahko tipično krivuljo rasti razdelimo na 4 dele: inkubacijska doba s počasno rastjo;eksponentna faza rasti z velikim naklonom, faza platoja in obdobje upadanja.Krivuljo rasti celic lahko dobimo tako, da narišemo število živih celic (10'000/mL) glede na čas kulture (h ali d).
Merjenje koncentracije in sposobnosti preživetja celic
Slika 1 Slike je zajel Countstar BioTech, saj so celice (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 in MDCK) v suspenziji obarvali s Trypan Blue.
Countstar se uporablja za celice s premerom med 5-180 um, kot so celice sesalcev, celice žuželk in nekateri planktoni.
Merjenje velikosti celice
Slika 2 Merjenje velikosti celic CHO celic pred in po plazmidni transfekciji.
A. Slike suspenzije celic CHO, obarvane s tripan modro pred in po transfekciji plazmida.
B. Primerjava histograma velikosti celic CHO pred in po plazmidni transfekciji.
Sprememba velikosti celice je ključna značilnost in se običajno meri v raziskavah celic.Običajno se meri v teh poskusih: transfekcija celic, test drog in testi aktivacije celic.Countstar zagotavlja statistične morfološke podatke, kot so velikosti celic, v 20 s.
Avtomatski števec celic Countstar lahko poda morfološke podatke celic, vključno s histogrami krožnosti in premera.
