Giao thức thử nghiệm
% Độc tính tế bào được tính theo công thức dưới đây.
Độc tính tế bào% = (Số lượng kiểm soát trực tiếp - Số lượng còn sống của đối chứng được điều trị) / Số lượng kiểm soát còn sống × 100
Bằng cách gắn nhãn các tế bào khối u đích bằng calcein AM không độc, không phóng xạ hoặc truyền nhiễm bằng GFP, chúng tôi có thể theo dõi quá trình tiêu diệt các tế bào khối u bởi các tế bào CAR-T.Trong khi các tế bào ung thư đích còn sống sẽ được gắn nhãn bằng calcein AM hoặc GFP màu xanh lá cây, các tế bào chết không thể giữ lại chất nhuộm màu xanh lá cây.Hoechst 33342 được sử dụng để nhuộm tất cả các tế bào (cả tế bào T và tế bào khối u), hoặc các tế bào khối u đích có thể được nhuộm bằng calcein AM liên kết màng, PI được sử dụng để nhuộm tế bào chết (cả tế bào T và tế bào khối u).Chiến lược nhuộm này cho phép phân biệt các tế bào khác nhau.
E: T Phụ thuộc tỷ lệ Độc tính tế bào của K562
Ví dụ hình ảnh huỳnh quang Hoechst 33342, CFSE, PI là tế bào đích K562 ở t = 3 giờ
Các hình ảnh huỳnh quang thu được cho thấy sự gia tăng Hoechst + CFSE + PI + Tế bào đích khi tỷ lệ E: T tăng lên
