Levensvatbaarheid met dubbele fluorescentie (AO/PI), acridine-oranje (AO) en propidiumjodide (PI) zijn nucleïnezuurkleuring en zuurbindende kleurstoffen.AO kan het membraan van zowel dode als levende cellen binnendringen en de kern kleuren, waardoor een groene fluorescentie ontstaat.Daarentegen kan PI alleen de desintegrerende membranen van dode kernhoudende cellen doordringen, waardoor rode fluorescentie wordt gegenereerd.De op afbeeldingen gebaseerde technologie van de Countstar Rigel sluit celfragmenten, puin en artefactdeeltjes uit, evenals ondermaatse gebeurtenissen zoals bloedplaatjes, wat een zeer nauwkeurig resultaat oplevert.Kortom, het Countstar Rigel-systeem kan voor elke stap van het celproductieproces worden gebruikt.

T/NK-cel-gemedieerde cytotoxiciteit In de onlangs door de FDA goedgekeurde CAR-T-celtherapie binden genetisch gemanipuleerde T-lymfocyten zich specifiek aan de beoogde kankercellen (T) en doden ze.De Countstar Rigel-analysatoren zijn in staat om dit volledige proces van T/NK-cel-gemedieerde cytotoxiciteit te analyseren.

Cytotoxiciteitsonderzoeken worden uitgevoerd door de doelkankercellen te labelen met CFSE of ze te transfecteren met GFP.Hoechst 33342 kan worden gebruikt om alle cellen te kleuren (zowel T-cellen als tumorcellen).Als alternatief kunnen doeltumorcellen worden gekleurd met CFSE.Propidiumjodide (PI) wordt gebruikt om dode cellen (zowel T-cellen als tumorcellen) te kleuren.Discriminatie tussen verschillende cellen kan worden verkregen met behulp van deze kleurstrategie.

GFP-transfectie-efficiëntie In moleculaire genetica, verschillende modelorganismen en celbiologie wordt het GFP-gen vaak gebruikt als een reporter voor expressiestudies.Momenteel gebruiken wetenschappers gewoonlijk fluorescentiemicroscopen of flowcytometers om de transfectie-efficiëntie van zoogdiercellen te analyseren.Maar het hanteren van de complexe technologie van een geavanceerde flowcytometer vereist een ervaren en hooggekwalificeerde operator.Countstar Rigel stelt gebruikers in staat om eenvoudig en nauwkeurig een transfectie-efficiëntietest uit te voeren zonder de operatie- en onderhoudskosten die gepaard gaan met traditionele flowcytometrie.

Celapoptose De voortgang van celapoptose kan worden gevolgd met behulp van FITC-geconjugeerd annexine-V in combinatie met 7-ADD.Fosfatidylserine (PS)-residuen bevinden zich normaal gesproken aan de binnenkant van het plasmamembraan van gezonde cellen.Tijdens vroege apoptose gaat de integriteit van het membraan verloren en wordt PS naar de buitenkant van het celmembraan verplaatst.Annexine V heeft een sterke affiniteit voor PS en is daarom de ideale marker voor vroege apoptotische cellen.

Celcyclus Tijdens celdeling bevatten cellen verhoogde hoeveelheden DNA.Gelabeld door PI, is een toename in fluorescentie-intensiteit recht evenredig met een accumulatie van DNA.De verschillen in de fluorescentie-intensiteiten van de afzonderlijke cellen zijn de indicatoren van de werkelijke status van de celcyclus. MCF 7-cellen werden behandeld met 4 M Nocodazol om deze cellen in verschillende stadia van hun celcyclus te stoppen.De helderveldbeelden die tijdens dit testscenario zijn verkregen, stellen ons in staat om elke afzonderlijke cel te identificeren.Het PI-fluorescentiekanaal van de Countstar Rigel identificeert de DNA-signalen van afzonderlijke cellen, zelfs in aggregaten.Een gedetailleerde analyse van de fluorescentie-intensiteiten kan worden uitgevoerd met behulp van de FCS.

CD Marker Fenotypering, De Countstar Rigel-modellen bieden een snellere, eenvoudigere en gevoeligere benadering van, op immuun gebaseerde fenotypering van cellen, efficiënter.Met afbeeldingen met hoge resolutie en krachtige geïntegreerde gegevensanalysemogelijkheden stelt de Countstar Rigel gebruikers in staat om consistent betrouwbare resultaten te bereiken zonder dat er uitgebreide complexe controle-instellingen en fluorescentiecompensatie-aanpassingen nodig zijn.

De celdifferentiatie van Cytokine Induced Killer (CIK) demonstreert de uitstekende prestatiekwaliteit van de Countstar Rigel-analysator in directe vergelijking met hoogwaardige flowcytometers.PBMC's van muizen in kweek werden gekleurd met CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE en CD56-PE en geïnduceerd door interleukine (IL) 6. Vervolgens gelijktijdig geanalyseerd met Countstar® Rigel en flowcytometrie.In deze test werden de CD3-CD4, de CD3-CD8 en de CD3-CD56 in drie groepen verdeeld om het aandeel van verschillende celsubpopulaties te bepalen.

Detectie van gedegenereerde cellen door middel van immunofluorescentie. Monoklonale antilichamen die cellijnen produceren, zullen enkele positieve klonen verliezen tijdens celproliferatie en passage als gevolg van afbraak of genetische mutaties.Een hoger verlies zal de productiviteit van het productieproces aanzienlijk beïnvloeden.Het monitoren van de afbraak speelt een belangrijke rol bij de procesbeheersing om de opbrengst aan antilichamen naar het optimum te verschuiven.

De meeste antilichamen die in de BioPharma-industrie worden geproduceerd, kunnen worden gedetecteerd door middel van immunofluorescentielabeling en kwantitatief worden geanalyseerd door de Countstar Rigel-serie.De helderveld- en fluorescentiekanaalafbeeldingen hieronder laten duidelijk die klonen zien die hun attribuut verloren om de gewenste antilichamen te produceren.De meer gedetailleerde analyse met de DeNovo FCS Express Image-software bevestigt dat 86,35% van alle cellen de immunoglobulinen tot expressie brengen, slechts 3,34 % is duidelijk negatief.

Trypan (hoofdletter B in blauw) Celtelling, Trypan-blauwkleuring wordt nog steeds gebruikt in de meeste celkweeklaboratoria.

De Trypan Blue Viability en Cell Density BioApp kan op alle Countstar Rigel-modellen worden geïnstalleerd.Onze beveiligde beeldherkenningsalgoritmen analyseren meer dan 20 parameters om elk gedetecteerd object te classificeren.

Cell Line Storage QC, In cell storage zorgt een geavanceerd kwaliteitsmanagementconcept voor een veilige, efficiënte bewaking van alle mobiele producten.Dit garandeert de stabiele kwaliteit van gecryopreserveerde cellen, gecryopreserveerde voor experimenten, procesontwikkeling en productie.

De Countstar Rigel verwerft afbeeldingen met een hoge resolutie en analyseert verschillende morfologische kenmerken van de cellulaire objecten, zoals diameter, vorm en aggregatietendens.Beelden van verschillende processtappen kunnen eenvoudig met elkaar vergeleken worden.Variaties in vorm en aggregatie kunnen dus gemakkelijk worden gedetecteerd door subjectieve menselijke metingen te vermijden.En de Countstar Rigel-database heeft een geavanceerd beheersysteem voor het opslaan en ophalen van afbeeldingen en gegevens.