Eksperimentalni protokol
% citotoksičnosti izračunava se prema donjoj jednadžbi.
Citotoksičnost % = (živi broj kontrole – živi broj tretiranih) / živi broj kontrole × 100
Obilježavanjem ciljnih tumorskih stanica netoksičnim, neradioaktivnim kalceinom AM ili transfektiranjem s GFP, možemo pratiti ubijanje tumorskih stanica od strane CAR-T stanica.Dok će žive ciljne stanice raka biti označene zelenim kalceinom AM ili GFP, mrtve stanice ne mogu zadržati zelenu boju.Hoechst 33342 se koristi za bojenje svih stanica (i T stanica i tumorskih stanica), alternativno, ciljane tumorske stanice mogu se bojati membranski vezanim kalceinom AM, PI se koristi za bojenje mrtvih stanica (i T stanica i tumorskih stanica).Ova strategija bojenja omogućuje razlikovanje različitih stanica.
E: T Citotoksičnost K562 ovisna o omjeru
Primjer Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescentne slike su K562 ciljne stanice u t = 3 sata
Rezultirajuće fluorescentne slike pokazale su povećanje Hoechst+CFSE+PI+ ciljnih stanica s povećanjem omjera E:T
