Eksperimental Protokol
Sitotoksiklik % aşağıdakı tənliklə hesablanır.
Sitotoksiklik % = (Canlı nəzarət sayları – Müalicə olunanların canlı sayları) / Canlı nəzarət sayıları × 100
Hədəf şiş hüceyrələrini toksik olmayan, radioaktiv olmayan kalsein AM ilə etiketləməklə və ya GFP ilə transfektsiya etməklə, biz şiş hüceyrələrinin CAR-T hüceyrələri tərəfindən öldürülməsinə nəzarət edə bilərik.Canlı hədəf xərçəng hüceyrələri yaşıl kalsein AM və ya GFP ilə etiketlənsə də, ölü hüceyrələr yaşıl boya saxlaya bilməz.Hoechst 33342 bütün hüceyrələri (həm T hüceyrələri, həm də şiş hüceyrələri) ləkələmək üçün istifadə olunur, alternativ olaraq hədəf şiş hüceyrələri membrana bağlı kalsein AM ilə rənglənə bilər, PI ölü hüceyrələri (həm T hüceyrələri, həm də şiş hüceyrələri) ləkələmək üçün istifadə olunur.Bu boyama strategiyası müxtəlif hüceyrələrin ayrı-seçkiliyinə imkan verir.
E: T nisbətindən asılı olaraq K562-nin Sitotoksikliyi
Məsələn Hoechst 33342, CFSE, PI floresan şəkilləri t = 3 saatda K562 hədəf hüceyrələridir.
Yaranan flüoresan görüntülər E: T nisbəti artdıqca Hoechst+CFSE+PI+ Hədəf hüceyrələrinin artımını göstərdi.
