Protocole experimental
Le % de cytotoxicité est calculé par l'équation ci-dessous.
% de cytotoxicité = (Numérations vivantes du contrôle - Numérations vivantes des traités) / Numérations vivantes du contrôle × 100
En marquant les cellules tumorales cibles avec de la calcéine AM non toxique et non radioactive ou en transfectant avec GFP, nous pouvons surveiller la destruction des cellules tumorales par les cellules CAR-T.Alors que les cellules cancéreuses cibles vivantes seront marquées par une calcéine verte AM ou GFP, les cellules mortes ne peuvent pas retenir le colorant vert.Hoechst 33342 est utilisé pour colorer toutes les cellules (cellules T et cellules tumorales), alternativement, les cellules tumorales cibles peuvent être colorées avec de la calcéine AM liée à la membrane, PI est utilisé pour colorer les cellules mortes (cellules T et cellules tumorales).Cette stratégie de coloration permet de discriminer différentes cellules.
E: Cytotoxicité dépendante du rapport T de K562
L'exemple Hoechst 33342, CFSE, images fluorescentes PI sont les cellules cibles K562 à t = 3 heures
Les images fluorescentes résultantes ont montré une augmentation des cellules cibles Hoechst + CFSE + PI + à mesure que le rapport E: T augmentait
