Experimenteel protocol
Het cytotoxiciteitspercentage wordt berekend met de onderstaande vergelijking.
Cytotoxiciteit % = (Levende tellingen van controle – Levende tellingen van behandelde) / Levende tellingen van controle × 100
Door de doeltumorcellen te labelen met niet-toxisch, niet-radioactief calceïne AM of transfecteren met GFP, kunnen we het doden van de tumorcellen door CAR-T-cellen volgen.Terwijl levende doelkankercellen worden gelabeld met een groene calceïne AM of GFP, kunnen de dode cellen de groene kleurstof niet vasthouden.Hoechst 33342 wordt gebruikt voor het kleuren van alle cellen (zowel T-cellen als tumorcellen), als alternatief kunnen doeltumorcellen worden gekleurd met membraangebonden calceïne AM, PI wordt gebruikt voor het kleuren van de dode cellen (zowel T-cellen als tumorcellen).Deze kleuringsstrategie zorgt voor het discrimineren van verschillende cellen.
E: T-ratio-afhankelijke cytotoxiciteit van K562
Het voorbeeld Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescerende beelden zijn de K562-doelcellen op t = 3 uur
De resulterende fluorescerende beelden vertoonden een toename van Hoechst+CFSE+PI+ Target-cellen naarmate de E:T-ratio toenam
