Protocollo sperimentale
La citotossicità % è calcolata dall'equazione seguente.
Citotossicità % = (conteggi vivi del controllo – conteggi vivi dei trattati) / conteggi vivi del controllo × 100
Etichettando le cellule tumorali bersaglio con calceina AM non tossica e non radioattiva o transfect con GFP, possiamo monitorare l'uccisione delle cellule tumorali da parte delle cellule CAR-T.Mentre le cellule tumorali bersaglio vive saranno etichettate da una calceina verde AM o GFP, le cellule morte non possono trattenere il colorante verde.Hoechst 33342 è usato per colorare tutte le cellule (sia le cellule T che le cellule tumorali), in alternativa, le cellule tumorali bersaglio possono essere colorate con calceina AM legata alla membrana, PI è usato per colorare le cellule morte (sia le cellule T che le cellule tumorali).Questa strategia di colorazione consente di discriminare cellule diverse.
E: T Citotossicità dipendente dal rapporto di K562
L'esempio di immagini fluorescenti Hoechst 33342, CFSE, PI sono le cellule bersaglio K562 a t = 3 ore
Le immagini fluorescenti risultanti hanno mostrato un aumento delle cellule bersaglio Hoechst + CFSE + PI + all'aumentare del rapporto E: T
