Eksperimentinis protokolas
Citotoksiškumo % apskaičiuojamas pagal toliau pateiktą lygtį.
Citotoksiškumas % = (gyvas kontrolinės grupės skaičius – gyvas gydytų asmenų skaičius) / gyvų kontrolinių grupių skaičius × 100
Pažymėdami tikslines naviko ląsteles netoksišku, neradioaktyviu kalceinu AM arba transfekuodami GFP, galime stebėti, kaip CAR-T ląstelės žudo naviko ląsteles.Nors gyvos tikslinės vėžio ląstelės bus pažymėtos žaliu kalceinu AM arba GFP, negyvos ląstelės negali išlaikyti žalių dažų.Hoechst 33342 naudojamas visoms ląstelėms (tiek T ląstelėms, tiek navikinėms ląstelėms) nudažyti, kitu atveju tikslinės naviko ląstelės gali būti nudažytos su membrana surištu kalceinu AM, o PI naudojamas negyvoms ląstelėms (tiek T ląstelėms, tiek naviko ląstelėms).Ši dažymo strategija leidžia atskirti skirtingas ląsteles.
E: T nuo santykio priklausomas K562 citotoksiškumas
Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescencinių vaizdų pavyzdys yra K562 tikslinės ląstelės, kai t = 3 val.
Gauti fluorescenciniai vaizdai parodė Hoechst + CFSE + PI + tikslinių ląstelių padidėjimą, nes padidėjo E: T santykis
