Protocolo experimental
El % de citotoxicidad se calcula mediante la siguiente ecuación.
% de citotoxicidad = (Cuentas vivas del control – Cuentas vivas de los tratados) / Cuentas vivas del control × 100
Al marcar las células tumorales diana con calceína AM no tóxica y no radiactiva o transfectar con GFP, podemos controlar la eliminación de las células tumorales por parte de las células CAR-T.Si bien las células cancerosas diana vivas se marcarán con calceína verde AM o GFP, las células muertas no pueden retener el tinte verde.Hoechst 33342 se usa para teñir todas las células (tanto las células T como las células tumorales), alternativamente, las células tumorales diana se pueden teñir con calceína AM unida a la membrana, PI se usa para teñir las células muertas (tanto las células T como las células tumorales).Esta estrategia de tinción permite la discriminación de diferentes células.
E: Citotoxicidad dependiente de la relación T de K562
Las imágenes fluorescentes Hoechst 33342, CFSE, PI de ejemplo son las células diana K562 en t = 3 horas
Las imágenes fluorescentes resultantes mostraron un aumento en las células objetivo Hoechst+CFSE+PI+ a medida que aumentaba la relación E:T
