실험 프로토콜
세포독성 %는 하기 식에 의해 계산된다.
세포독성 % = (대조군의 라이브 카운트 – 처리된 라이브 카운트) / 대조군의 라이브 카운트 × 100
표적 종양 세포를 무독성, 비방사성 칼세인 AM으로 표지하거나 GFP로 형질감염함으로써 CAR-T 세포에 의한 종양 세포의 사멸을 모니터링할 수 있습니다.살아있는 표적 암세포는 녹색 칼세인 AM 또는 GFP로 표지되지만 죽은 세포는 녹색 염료를 유지할 수 없습니다.Hoechst 33342는 모든 세포(T 세포 및 종양 세포 모두)를 염색하는 데 사용되며, 대안으로 표적 종양 세포는 막 결합 칼세인 AM으로 염색할 수 있으며, PI는 죽은 세포(T 세포 및 종양 세포 모두)를 염색하는 데 사용됩니다.이 염색 전략을 통해 다른 세포를 구별할 수 있습니다.
E: K562의 T 비율 의존성 세포독성
Hoechst 33342, CFSE, PI 형광 이미지의 예는 t = 3시간에서 K562 표적 세포입니다.
결과 형광 이미지는 E:T 비율이 증가함에 따라 Hoechst+CFSE+PI+ 표적 세포의 증가를 보여주었습니다.
