Eksperymentalny protokół
% cytotoksyczności oblicza się z poniższego równania.
Cytotoksyczność % = (żywe liczby kontroli – żywe wyniki leczenia) / żywe liczby kontroli × 100
Poprzez znakowanie docelowych komórek nowotworowych nietoksyczną, nieradioaktywną kalceiną AM lub transfekcją GFP, możemy monitorować zabijanie komórek nowotworowych przez komórki CAR-T.Podczas gdy żywe docelowe komórki rakowe będą znakowane zieloną kalceiną AM lub GFP, martwe komórki nie mogą zatrzymać zielonego barwnika.Hoechst 33342 stosuje się do barwienia wszystkich komórek (zarówno komórek T, jak i komórek nowotworowych), alternatywnie, docelowe komórki nowotworowe można wybarwić kalceiną AM związaną z błoną, PI stosuje się do barwienia martwych komórek (zarówno komórek T, jak i komórek nowotworowych).Ta strategia barwienia pozwala na rozróżnienie różnych komórek.
E: Cytotoksyczność zależna od współczynnika T K562
Przykładowe obrazy fluorescencyjne Hoechst 33342, CFSE, PI to komórki docelowe K562 w czasie t = 3 godziny
Uzyskane obrazy fluorescencyjne wykazały wzrost liczby komórek docelowych Hoechst+CFSE+PI+ wraz ze wzrostem stosunku E:T
