Katseprotokoll
Tsütotoksilisuse % arvutatakse alloleva võrrandi abil.
Tsütotoksilisus % = (kontrollide elusloodused – ravitud loomade elusloodused) / kontrollide elusloodused × 100
Märgistades sihtmärk-kasvajarakud mittetoksilise, mitteradioaktiivse kaltseiini AM-ga või transfekteerides GFP-ga, saame jälgida kasvajarakkude surmamist CAR-T-rakkude poolt.Kuigi elusad sihtmärgiks olevad vähirakud märgistatakse rohelise kaltseiini AM või GFP abil, ei saa surnud rakud rohelist värvainet säilitada.Hoechst 33342 kasutatakse kõigi rakkude (nii T-rakkude kui ka kasvajarakkude) värvimiseks, teise võimalusena saab sihtkasvajarakke värvida membraaniga seotud kaltseiini AM-ga, PI-d kasutatakse surnud rakkude (nii T-rakkude kui ka kasvajarakkude) värvimiseks.See värvimisstrateegia võimaldab eristada erinevaid rakke.
E: T K562 suhtest sõltuv tsütotoksilisus
Hoechst 33342, CFSE, PI fluorestseeruvate kujutiste näited on K562 sihtrakud t = 3 tundi
Saadud fluorestseeruvad kujutised näitasid Hoechst+CFSE+PI+ sihtrakkude arvu suurenemist, kuna E:T suhe suurenes
