Experimentální protokol
Cytotoxicita % se vypočítá podle rovnice níže.
Cytotoxicita % = (živé počty kontrol – živé počty léčených) / živé počty kontrol × 100
Označením cílových nádorových buněk netoxickým, neradioaktivním kalceinem AM nebo transfekcí s GFP můžeme monitorovat zabíjení nádorových buněk buňkami CAR-T.Zatímco živé cílové rakovinné buňky budou označeny zeleným kalceinem AM nebo GFP, mrtvé buňky si zelené barvivo neudrží.Hoechst 33342 se používá k barvení všech buněk (jak T buněk, tak nádorových buněk), alternativně mohou být cílové nádorové buňky barveny kalceinem AM vázaným na membránu, PI se používá k barvení mrtvých buněk (jak T buněk, tak nádorových buněk).Tato strategie barvení umožňuje rozlišení různých buněk.
E: Cytotoxicita K562 závislá na T poměru
Příklady fluorescenčních snímků Hoechst 33342, CFSE, PI jsou cílové buňky K562 v čase t = 3 hodiny
Výsledné fluorescenční snímky ukázaly nárůst v cílových buňkách Hoechst+CFSE+PI+ se zvýšením poměru E:T
