بروتوكول تجريبي
يتم حساب السمية الخلوية٪ بالمعادلة أدناه.
السمية الخلوية٪ = (أعداد التحكم الحية - الأعداد الحية للمعالجة) / الأعداد الحية للتحكم × 100
من خلال تصنيف الخلايا السرطانية المستهدفة بـ calcein AM غير السامة وغير المشعة أو transfect مع GFP ، يمكننا مراقبة قتل الخلايا السرطانية بواسطة خلايا CAR-T.بينما سيتم تمييز الخلايا السرطانية المستهدفة الحية بواسطة calcein AM أو GFP الأخضر ، لا يمكن للخلايا الميتة الاحتفاظ بالصبغة الخضراء.يستخدم Hoechst 33342 لتلطيخ جميع الخلايا (كل من الخلايا التائية والخلايا السرطانية) ، بدلاً من ذلك ، يمكن تلطيخ الخلايا السرطانية المستهدفة بغشاء كالسين AM ، يستخدم PI لتلطيخ الخلايا الميتة (كل من الخلايا التائية والخلايا السرطانية).تسمح استراتيجية التلوين هذه بالتمييز بين الخلايا المختلفة.
E: T نسبة سمية خلوية تعتمد على K562
صور Hoechst 33342 و CFSE و PI الفلورية هي الخلايا المستهدفة K562 عند t = 3 ساعات
أظهرت الصور الفلورية الناتجة زيادة في الخلايا المستهدفة Hoechst + CFSE + PI + حيث زادت نسبة E: T
