A viabilidade de dobre fluorescencia (AO/PI), a laranxa de acridina (AO) e o ioduro de propidio (PI) son colorantes nucleicos e de unión a ácidos.AO pode penetrar na membrana das células vivas e mortas e manchar o núcleo, xerando unha fluorescencia verde.Pola contra, o PI só pode penetrar nas membranas en desintegración das células nucleadas mortas, xerando fluorescencia vermella.A tecnoloxía baseada en imaxes do Countstar Rigel exclúe fragmentos celulares, detritos e partículas de artefactos, así como eventos de pequeno tamaño como as plaquetas, o que dá un resultado moi preciso.En conclusión, o sistema Countstar Rigel pódese utilizar para cada paso do proceso de fabricación das células.

Citotoxicidade mediada por células T/NK, na terapia con células CAR-T aprobada recentemente pola FDA, os linfocitos T modificados xeneticamente únense especificamente ás células cancerosas (T) dirixidas e mátanas.Os analizadores Countstar Rigel son capaces de analizar este proceso completo de citotoxicidade mediada por células T/NK.

Os estudos de citotoxicidade realízanse marcando as células cancerosas diana con CFSE ou transfectándoas con GFP.Hoechst 33342 pódese usar para tinguir todas as células (tanto células T como células tumorais).Alternativamente, as células tumorais diana pódense tinguir con CFSE.O ioduro de propidio (PI) úsase para tinguir células mortas (tanto células T como células tumorais).A discriminación entre as diferentes células pódese conseguir mediante esta estratexia de tinción.

Eficiencia de transfección de GFP, en xenética molecular, en varios organismos modelo e en bioloxía celular, o xene GFP utilízase con frecuencia como reporteiro para estudos de expresión.Actualmente, os científicos utilizan habitualmente microscopios fluorescentes ou citómetros de fluxo para analizar a eficiencia de transfección das células de mamíferos.Pero manexar a complexa tecnoloxía dun citómetro de fluxo avanzado require un operador experimentado e altamente cualificado.Countstar Rigel permite aos usuarios realizar un ensaio de eficiencia de transfección con facilidade e precisión sen os custos de operación e mantemento asociados á citometría de fluxo tradicional.

Apoptose celular, o progreso da apoptose celular pódese controlar usando Annexin-V conxugado con FITC en combinación con 7-ADD.Os residuos de fosfatidilserina (PS) sitúanse normalmente no lado interno da membrana plasmática das células sans.Durante a apoptose temperá, a integridade da membrana pérdese e o PS translocarase ao exterior da membrana celular.A anexina V ten unha forte afinidade co PS e, polo tanto, é o marcador ideal para as primeiras células apoptóticas.

Ciclo celular, durante a división celular, as células conteñen unha maior cantidade de ADN.Marcado por PI, un aumento da intensidade da fluorescencia é directamente proporcional a unha acumulación de ADN.As diferenzas nas intensidades de fluorescencia das células individuais son os indicadores do estado real do ciclo celular. As células MCF 7 foron tratadas con 4μM de nocodazol para deter estas células en diferentes etapas do seu ciclo celular.As imaxes de campo claro adquiridas durante este escenario de proba permítennos identificar cada célula individual.A canle de fluorescencia PI do Countstar Rigel identifica os sinais de ADN de células individuais incluso en agregados.Pódese realizar unha análise detallada das intensidades de fluorescencia mediante o FCS.

Fenotipado de marcadores de CD, os modelos Countstar Rigel ofrecen un enfoque máis rápido, máis sinxelo e máis sensible para a fenotipificación das células baseada na inmuno de forma máis eficiente.Con imaxes de alta resolución e poderosas capacidades de análise de datos integradas, o Countstar Rigel permite aos usuarios conseguir resultados fiables de forma consistente sen necesidade de axustes de control complexos e axustes de compensación de fluorescencia.

A diferenciación celular Killer inducida por citocinas (CIK) demostra a excelente calidade de rendemento do analizador Countstar Rigel en comparación directa cos citómetros de fluxo de alta clase.As PBMC de rato en cultivo tinéronse con CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE e CD56-PE, e inducíronse por interleucina (IL) 6. Despois analizáronse simultaneamente con Countstar® Rigel e con citometría de fluxo.Nesta proba, os CD3-CD4, os CD3-CD8 e os CD3-CD56 dividíronse en tres grupos, para determinar a proporción de diferentes subpoboacións celulares.

Detección de células dexeneradas por inmunofluorescencia, os anticorpos monoclonais que producen liñas celulares perderán algúns clons positivos durante a proliferación e o paso celular debido á degradación ou mutacións xenéticas.Unha maior perda afectará significativamente á produtividade do proceso de fabricación.O seguimento da degradación xoga un papel importante no control do proceso para cambiar o rendemento de anticorpos ao óptimo.

A maioría dos anticorpos fabricados na industria BioPharma pódense detectar mediante o etiquetado de inmunofluorescencia e analizarse cuantitativamente pola serie Countstar Rigel.As imaxes de campo brillante e canle de fluorescencia a continuación mostran claramente aqueles clons que perderon o seu atributo para producir os anticorpos desexados.A análise máis detallada co software DeNovo FCS Express Image confirma que o 86,35 % de todas as células expresan inmunoglobulinas, só o 3,34 % son claramente negativas.

Conta de células tripán (con maiúscula B en azul), a tinción con azul tripano aínda se usa na maioría dos laboratorios de cultivo celular.

A BioApp de viabilidade e densidade celular Trypan Blue pódese instalar en todos os modelos Countstar Rigel.Os nosos algoritmos de recoñecemento de imaxes protexidas analizan máis de 20 parámetros para clasificar cada obxecto detectado.

Cell Line Storage QC, no almacenamento celular, un concepto sofisticado de xestión da calidade garante un seguimento seguro e eficiente de todos os produtos móbiles.Isto garante a calidade estable das células criopreservadas, criopreservadas para experimentos, desenvolvemento de procesos e produción.

O Countstar Rigel adquire imaxes de alta resolución, analizando diversas características morfolóxicas dos obxectos celulares como o diámetro, a forma e a tendencia de agregación.As imaxes de diferentes pasos do proceso pódense comparar facilmente entre si.Así, as variacións na forma e na agregación pódense detectar facilmente, evitando medicións humanas subxectivas.E a base de datos Countstar Rigel ten un sofisticado sistema de xestión para o almacenamento e recuperación de imaxes e datos.