Żywotność podwójnej fluorescencji (AO/PI), oranż akrydyny (AO) i jodek propidyny (PI) to barwniki do barwienia jąder nukleinowych i barwniki wiążące kwasy.AO może przenikać przez błonę martwych i żywych komórek i barwić jądro, generując zieloną fluorescencję.W przeciwieństwie do tego, PI może przenikać jedynie przez rozpadające się błony martwych komórek jądrzastych, generując czerwoną fluorescencję.Oparta na obrazach technologia Countstar Rigel wyklucza fragmenty komórek, szczątki i cząstki artefaktów, a także niewymiarowe zdarzenia, takie jak płytki krwi, dając bardzo dokładne wyniki.Podsumowując, system Countstar Rigel może być używany na każdym etapie procesu produkcji ogniw.

Cytotoksyczność za pośrednictwem komórek T/NK W niedawno zatwierdzonej przez FDA terapii komórek CAR-T genetycznie zmodyfikowane limfocyty T wiążą się specyficznie z docelowymi komórkami rakowymi (T) i zabijają je.Analizatory Countstar Rigel są w stanie przeanalizować cały proces cytotoksyczności za pośrednictwem komórek T/NK.

Badania cytotoksyczności przeprowadza się przez znakowanie docelowych komórek nowotworowych CFSE lub transfekowanie ich GFP.Hoechst 33342 można stosować do barwienia wszystkich komórek (zarówno komórek T, jak i komórek nowotworowych).Alternatywnie, docelowe komórki nowotworowe można wybarwić CFSE.Jodek propidyny (PI) służy do barwienia martwych komórek (zarówno limfocytów T, jak i komórek nowotworowych).Za pomocą tej strategii barwienia można uzyskać rozróżnienie między różnymi komórkami.

Wydajność transfekcji GFP. W genetyce molekularnej, różnych organizmach modelowych i biologii komórki gen GFP jest często używany jako reporter do badań ekspresji.Obecnie naukowcy powszechnie używają mikroskopów fluorescencyjnych lub cytometrów przepływowych do analizy wydajności transfekcji komórek ssaków.Jednak obsługa złożonej technologii zaawansowanego cytometru przepływowego wymaga doświadczonego i wysoko wykwalifikowanego operatora.Countstar Rigel umożliwia użytkownikom łatwe i dokładne wykonanie testu wydajności transfekcji bez kosztów obsługi i konserwacji związanych z tradycyjną cytometrią przepływową.

Apoptoza komórek Postęp apoptozy komórek można monitorować przy użyciu aneksyny V sprzężonej z FITC w połączeniu z 7-ADD.Reszty fosfatydyloseryny (PS) są zwykle zlokalizowane po wewnętrznej stronie błony komórkowej zdrowych komórek.Podczas wczesnej apoptozy integralność błony zostaje utracona, a PS zostanie przeniesiony na zewnątrz błony komórkowej.Aneksyna V ma silne powinowactwo do PS i dlatego jest idealnym markerem dla komórek wczesnej apoptozy.

Cykl komórkowy Podczas podziału komórki zawierają zwiększone ilości DNA.Wyznakowany przez PI wzrost intensywności fluorescencji jest wprost proporcjonalny do akumulacji DNA.Różnice w intensywności fluorescencji pojedynczych komórek są wskaźnikami aktualnego stanu cyklu komórkowego. Komórki MCF 7 potraktowano 4 μM Nocodazolu w celu zatrzymania tych komórek na różnych etapach ich cyklu komórkowego.Obrazy jasnego pola uzyskane podczas tego scenariusza testowego pozwalają nam zidentyfikować każdą pojedynczą komórkę.Kanał fluorescencji PI Countstar Rigel identyfikuje sygnały DNA pojedynczych komórek, nawet w agregatach.Szczegółową analizę intensywności fluorescencji można przeprowadzić za pomocą FCS.

Fenotypowanie markerów CD, modele Countstar Rigel oferują szybsze, prostsze i bardziej czułe podejście do fenotypowania komórek opartego na odporności.Dzięki obrazom o wysokiej rozdzielczości i potężnym możliwościom zintegrowanej analizy danych, Countstar Rigel pozwala użytkownikom uzyskiwać niezmiennie wiarygodne wyniki bez potrzeby stosowania rozbudowanych, złożonych ustawień sterowania i regulacji kompensacji fluorescencji.

Różnicowanie komórek typu Cytokine Induced Killer (CIK) demonstruje wyjątkową jakość działania analizatora Countstar Rigel w bezpośrednim porównaniu z wysokiej klasy cytometrami przepływowymi.PBMC myszy w hodowli wybarwiono CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE i CD56-PE i indukowano interleukiną (IL) 6. Następnie analizowano jednocześnie za pomocą Countstar® Rigel i cytometrii przepływowej.W tym teście CD3-CD4, CD3-CD8 i CD3-CD56 podzielono na trzy grupy w celu określenia proporcji różnych subpopulacji komórek.

Wykrywanie zdegenerowanych komórek za pomocą immunofluorescencji, przeciwciała monoklonalne wytwarzające linie komórkowe stracą niektóre pozytywne klony podczas proliferacji i pasażowania komórek z powodu degradacji lub mutacji genetycznych.Większa strata znacząco wpłynie na wydajność procesu produkcyjnego.Monitorowanie degradacji odgrywa ważną rolę w kontroli procesu, aby przesunąć wydajność przeciwciał do optymalnej.

Większość przeciwciał wytwarzanych w przemyśle BioPharma można wykryć za pomocą znakowania immunofluorescencyjnego i analizować ilościowo za pomocą serii Countstar Rigel.Poniższe obrazy jasnego pola i kanałów fluorescencyjnych wyraźnie pokazują te klony, które utraciły zdolność wytwarzania pożądanych przeciwciał.Bardziej szczegółowa analiza za pomocą oprogramowania DeNovo FCS Express Image potwierdza, że ​​86,35% wszystkich komórek wyraża immunoglobuliny, tylko 3,34% jest wyraźnie ujemnych.

Trypan (wielkość liter B na niebiesko) Zliczanie komórek, barwienie błękitem trypanu jest nadal stosowane w większości laboratoriów hodowli komórek.

Trypan Blue Viability i Cell Density BioApp można zainstalować we wszystkich modelach Countstar Rigel.Nasze algorytmy rozpoznawania chronionego obrazu analizują ponad 20 parametrów, aby sklasyfikować każdy wykryty obiekt.

Przechowywanie linii komórkowych QC, W przechowywaniu komórkowym zaawansowana koncepcja zarządzania jakością zapewnia bezpieczne i wydajne monitorowanie wszystkich produktów komórkowych.Gwarantuje to stabilną jakość kriokonserwowanych komórek, kriokonserwowanych do eksperymentów, rozwoju procesu i produkcji.

Countstar Rigel pozyskuje obrazy w wysokiej rozdzielczości, analizując różne cechy morfologiczne obiektów komórkowych, takie jak średnica, kształt i tendencja do agregacji.Obrazy różnych etapów procesu można łatwo ze sobą porównać.Dzięki temu różnice w kształcie i agregacji można łatwo wykryć, unikając subiektywnych pomiarów dokonywanych przez ludzi.Baza danych Countstar Rigel posiada zaawansowany system zarządzania do przechowywania i wyszukiwania obrazów i danych.