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Per la terapia cellulare CAR-T

  • 1.Collezione
  • 2.Isolamento
  • 3. Modifica
  • 4.Espansione
  • 5. Raccolta
  • 6. Controllo qualità del prodotto
  • 7.Trattamento

Ciò che possiamo fare

  • Fattibilità AO/PI
  • Citotossicità cellulare
  • Efficienza di trasfezione
  • Apoptosi cellulare
  • Ciclo cellulare
  • Marcatore CD
  • Cellule degenerate
  • Conteggio cellulare
  • Linea cellulare
AO/PI Viability
Fattibilità AO/PI

La vitalità a doppia fluorescenza (AO/PI), l'arancio di acridina (AO) e lo ioduro di propidio (PI) sono coloranti nucleici nucleari e leganti gli acidi.L'AO può penetrare nella membrana sia delle cellule morte che di quelle viventi e colora il nucleo, generando una fluorescenza verde.Al contrario, PI può solo permeare le membrane disintegranti delle cellule nucleate morte, generando fluorescenza rossa.La tecnologia basata sulle immagini di Countstar Rigel esclude frammenti cellulari, detriti e particelle di artefatti, nonché eventi sottodimensionati come le piastrine, fornendo un risultato estremamente accurato.In conclusione, il sistema Countstar Rigel può essere utilizzato per ogni fase del processo di produzione delle celle.

Cell Cytotoxicity
Citotossicità cellulare

Citotossicità cellulo-mediata T/NK, nella terapia cellulare CAR-T recentemente approvata dalla FDA, i linfociti T geneticamente modificati si legano specificamente alle cellule tumorali (T) mirate e le uccidono.Gli analizzatori Countstar Rigel sono in grado di analizzare questo processo completo di citotossicità cellulo-mediata T/NK.

Gli studi di citotossicità vengono eseguiti etichettando le cellule tumorali bersaglio con CFSE o trasfettandole con GFP.Hoechst 33342 può essere utilizzato per colorare tutte le cellule (sia le cellule T che le cellule tumorali).In alternativa, le cellule tumorali bersaglio possono essere colorate con CFSE.Lo ioduro di propidio (PI) viene utilizzato per colorare le cellule morte (sia cellule T che cellule tumorali).La discriminazione tra cellule diverse può essere ottenuta utilizzando questa strategia di colorazione.

Transfection Efficiency
Efficienza di trasfezione

Efficienza di trasfezione GFP, in genetica molecolare, vari organismi modello e biologia cellulare, il gene GFP è spesso usato come reporter per studi di espressione.Attualmente, gli scienziati utilizzano comunemente microscopi fluorescenti o citometri a flusso per analizzare l'efficienza di trasfezione delle cellule di mammifero.Ma gestire la complessa tecnologia di un citometro a flusso avanzato richiede un operatore esperto e altamente qualificato.Countstar Rigel consente agli utenti di eseguire in modo semplice e accurato un test di efficienza della trasfezione senza i costi operativi e di manutenzione associati alla citometria a flusso tradizionale.

Cell Apoptosis
Apoptosi cellulare

Apoptosi cellulare, il progresso dell'apoptosi cellulare può essere monitorato utilizzando l'Annessina-V coniugata con FITC in combinazione con 7-ADD.I residui di fosfatidilserina (PS) si trovano normalmente sul lato interno della membrana plasmatica delle cellule sane.Durante l'apoptosi precoce, l'integrità della membrana viene persa e la PS verrà traslocata all'esterno della membrana cellulare.L'annessina V ha una forte affinità con il PS ed è quindi il marcatore ideale per le prime cellule apoptotiche.

Cell Cycle
Ciclo cellulare

Ciclo cellulare, durante la divisione cellulare, le cellule contengono una maggiore quantità di DNA.Etichettato da PI, un aumento dell'intensità della fluorescenza è direttamente proporzionale a un accumulo di DNA.Le differenze nelle intensità di fluorescenza delle singole cellule sono gli indicatori dello stato effettivo del ciclo cellulare Le cellule MCF 7 sono state trattate con 4μM di Nocodazolo per arrestare queste cellule in diverse fasi del loro ciclo cellulare.Le immagini in campo chiaro acquisite durante questo scenario di test ci consentono di identificare ogni singola cella.Il canale di fluorescenza PI del Countstar Rigel identifica i segnali del DNA di singole cellule anche in aggregati.Un'analisi dettagliata delle intensità di fluorescenza può essere eseguita utilizzando l'FCS.

CD Marker
Marcatore CD

Fenotipizzazione dei marcatori CD, i modelli Countstar Rigel offrono un approccio più rapido, più semplice e più sensibile alla fenotipizzazione immunologica delle cellule più efficiente.Con immagini ad alta risoluzione e potenti capacità integrate di analisi dei dati, Countstar Rigel consente agli utenti di ottenere risultati costantemente affidabili senza la necessità di impostazioni di controllo complesse e estese e regolazioni della compensazione della fluorescenza.

La differenziazione cellulare Cytokine Induced Killer (CIK) dimostra l'eccezionale qualità delle prestazioni dell'analizzatore Countstar Rigel in confronto diretto ai citometri a flusso di alta classe.I PBMC di topo in coltura sono stati colorati con CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE e CD56-PE e indotti da interleuchina (IL) 6. Quindi analizzati contemporaneamente con Countstar® Rigel e citometria a flusso.In questo test, il CD3-CD4, il CD3-CD8 e il CD3-CD56 sono stati divisi in tre gruppi, per determinare la proporzione di diverse sottopopolazioni cellulari.

Degenerated Cells
Cellule degenerate

Rilevamento di cellule degenerate mediante immunofluorescenza, gli anticorpi monoclonali che producono linee cellulari perderanno alcuni cloni positivi durante la proliferazione e il passaggio delle cellule a causa della degradazione o delle mutazioni genetiche.Una perdita maggiore influirà in modo significativo sulla produttività del processo di produzione.Il monitoraggio della degradazione gioca un ruolo importante nel controllo del processo per spostare la resa degli anticorpi in modo ottimale.

La maggior parte degli anticorpi prodotti nell'industria biofarmaceutica può essere rilevata mediante etichettatura in immunofluorescenza e analizzata quantitativamente dalla serie Countstar Rigel.Le immagini del campo luminoso e del canale di fluorescenza sotto mostrano chiaramente quei cloni che hanno perso il loro attributo per produrre gli anticorpi desiderati.L'analisi più dettagliata con il software DeNovo FCS Express Image conferma che l'86,35% di tutte le cellule esprime le immunoglobuline, solo il 3,34% è chiaramente negativo.

Cell Counting
Conteggio cellulare

Contando le cellule Trypan (capitalizza B in blu), la colorazione blu Trypan è ancora utilizzata nella maggior parte dei laboratori di coltura cellulare.

La bioapp Trypan Blue Viability e Cell Density può essere installata su tutti i modelli Countstar Rigel.I nostri algoritmi di riconoscimento delle immagini protette analizzano più di 20 parametri per classificare ogni singolo oggetto rilevato.

Cell Line
Linea cellulare

Cell Line Storage QC, Nell'immagazzinamento cellulare, un sofisticato concetto di gestione della qualità garantisce un monitoraggio sicuro ed efficiente di tutti i prodotti cellulari.Ciò garantisce la qualità stabile delle cellule crioconservate, crioconservate per esperimenti, sviluppo di processi e produzione.

Il Countstar Rigel acquisisce immagini ad alta risoluzione, analizzando varie caratteristiche morfologiche degli oggetti cellulari come diametro, forma e tendenza all'aggregazione.Le immagini di diverse fasi del processo possono essere facilmente confrontate tra loro.Quindi le variazioni di forma e di aggregazione possono essere facilmente rilevate, evitando misurazioni umane soggettive.E il database di Countstar Rigel dispone di un sofisticato sistema di gestione per l'archiviazione e il recupero di immagini e dati.

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