အိမ် » CAR-T ဆဲလ်ကုထုံးအတွက်

CAR-T ဆဲလ်ကုထုံးအတွက်

  • 1.Collection
  • 2.Isolation
  • ၃။ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်း။
  • 4. ချဲ့ထွင်ခြင်း။
  • 5. ရိတ်သိမ်းခြင်း။
  • 6.Product QC
  • 7. ကုသမှု

ငါတို့ဘာလုပ်နိုင်လဲ။

  • AO/PI အလားအလာ
  • ဆဲလ် Cytotoxicity
  • Transfection Efficiency
  • ဆဲလ် Apoptosis
  • ဆဲလ်သံသရာ
  • CD အမှတ်အသား
  • Degenerated Cells များ
  • ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်း။
  • ဆဲလ်လိုင်း
AO/PI Viability
AO/PI အလားအလာ

Dual-fluorescence Viability (AO/PI)၊ Acridine လိမ္မော်ရောင် (AO) နှင့် ပရောပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက် (PI) တို့သည် နျူကလိယ စွန်းထင်းခြင်းနှင့် အက်ဆစ်ပေါင်းစပ်ထားသော ဆိုးဆေးများဖြစ်သည်။AO သည် အသေများနှင့် သက်ရှိဆဲလ်များ၏ အမြှေးပါးကို ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်နိုင်ပြီး နျူကလိယကို စွန်းထင်းစေကာ စိမ်းလန်းသော အလင်းရောင်ကို ထုတ်ပေးပါသည်။ဆန့်ကျင်ဘက်အားဖြင့်၊ PI သည် ဆဲလ်သေများ၏ ပြိုကွဲနေသော အမြှေးပါးများကိုသာ စိမ့်ဝင်နိုင်ပြီး အနီရောင် fluorescence ကို ထုတ်ပေးပါသည်။Countstar Rigel ၏ ရုပ်ပုံအခြေခံနည်းပညာသည် ဆဲလ်အပိုင်းအစများ၊ အပျက်အစီးများနှင့် ရှေးဟောင်းပစ္စည်းအမှုန်အမွှားများအပြင် platelets ကဲ့သို့သော သေးငယ်သောဖြစ်ရပ်များကို ဖယ်ထုတ်ထားပြီး အလွန်တိကျသောရလဒ်ကိုပေးသည်။နိဂုံးချုပ်အားဖြင့်၊ Countstar Rigel စနစ်ကို ဆဲလ်ထုတ်လုပ်မှု လုပ်ငန်းစဉ်၏ အဆင့်တိုင်းအတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။

Cell Cytotoxicity
ဆဲလ် Cytotoxicity

T/NK Cell-Mediated Cytotoxicity၊ မကြာသေးမီက FDA မှခွင့်ပြုထားသော CAR-T ဆဲလ်ကုထုံးတွင်၊ မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော T-lymphocytes များသည် ပစ်မှတ်ထားသောကင်ဆာဆဲလ်များ (T) နှင့် အတိအကျချည်နှောင်ကာ ၎င်းတို့ကိုသတ်ပစ်သည်။Countstar Rigel ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသူများသည် T/NK Cell-Mediated Cytotoxicity ၏ ပြီးပြည့်စုံသော လုပ်ငန်းစဉ်ကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာနိုင်သည်။

Cytotoxicity လေ့လာမှုများကို ပစ်မှတ်ကင်ဆာဆဲလ်များကို CFSE ဖြင့် တံဆိပ်တပ်ခြင်း သို့မဟုတ် ၎င်းတို့ကို GFP ဖြင့် ကူးစက်ခြင်းဖြင့် လုပ်ဆောင်သည်။Hoechst 33342 ကို ဆဲလ်အားလုံး (T ဆဲလ်များနှင့် အကျိတ်ဆဲလ်များ) အားလုံးကို စွန်းထင်းစေရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။တနည်းအားဖြင့် ပစ်မှတ်အကျိတ်ဆဲလ်များကို CFSE ဖြင့် စွန်းထင်းနိုင်သည်။Propidium iodide (PI) ကို ဆဲလ်သေများ (T cells နှင့် tumor cells နှစ်ခုလုံး) ကို စွန်းထင်းစေရန် အသုံးပြုသည်။ဤအရောင်ခြယ်နည်းဗျူဟာကို အသုံးပြု၍ မတူညီသောဆဲလ်များအကြား ခွဲခြားဆက်ဆံမှုကို ရရှိနိုင်သည်။

Transfection Efficiency
Transfection Efficiency

GFP ကူးပြောင်းမှုထိရောက်မှု၊ မော်လီကျူးမျိုးရိုးဗီဇ၊ စံပြသက်ရှိမျိုးစုံနှင့် ဆဲလ်ဇီဝဗေဒတွင် GFP ဗီဇကို ထုတ်ဖော်ပြသလေ့လာမှုများအတွက် သတင်းထောက်အဖြစ် မကြာခဏအသုံးပြုသည်။လက်ရှိတွင် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် နို့တိုက်သတ္တဝါဆဲလ်များ၏ ကူးဆက်ခြင်းထိရောက်မှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် fluorescent microscopes သို့မဟုတ် flow cytometers ကို အသုံးပြုကြသည်။သို့သော် အဆင့်မြင့် flow cytometer ၏ ရှုပ်ထွေးသောနည်းပညာကို ကိုင်တွယ်ရာတွင် အတွေ့အကြုံရှိပြီး အရည်အချင်းပြည့်မီသော အော်ပရေတာတစ်ခု လိုအပ်ပါသည်။Countstar Rigel သည် အသုံးပြုသူများအား သမားရိုးကျစီးဆင်းမှု cytometry နှင့်ဆက်စပ်သော လည်ပတ်မှုနှင့် ပြုပြင်ထိန်းသိမ်းမှုစရိတ်များမပါဘဲ အလွယ်တကူနှင့် တိကျစွာလုပ်ဆောင်နိုင်စေပါသည်။

Cell Apoptosis
ဆဲလ် Apoptosis

Cell Apoptosis၊ 7-ADD နှင့် FITC conjugated Annexin-V ကို အသုံးပြု၍ ဆဲလ် apoptosis ၏တိုးတက်မှုကို စောင့်ကြည့်နိုင်သည်။Phosphatidylserine (PS) အကြွင်းအကျန်များသည် ပုံမှန်အားဖြင့် ကျန်းမာသောဆဲလ်များ၏ ပလာစမာအမြှေးပါး၏ အတွင်းဘက်တွင် တည်ရှိပါသည်။အစောပိုင်း apoptosis ကာလအတွင်း၊ အမြှေးပါးခိုင်မာမှုပျောက်ဆုံးသွားပြီး PS သည် ဆဲလ်အမြှေးပါး၏ အပြင်ဘက်သို့ ကူးပြောင်းသွားမည်ဖြစ်သည်။Annexin V သည် PS နှင့် ခိုင်မာသော ဆက်နွယ်မှုရှိပြီး ထို့ကြောင့် အစောပိုင်း Apoptotic ဆဲလ်များအတွက် စံပြအမှတ်အသားဖြစ်သည်။

Cell Cycle
ဆဲလ်သံသရာ

Cell Cycle၊ ဆဲလ်ခွဲဝေစဉ်တွင်၊ ဆဲလ်များတွင် DNA ပမာဏ တိုးလာသည်။PI ဖြင့် တံဆိပ်တပ်ထားသော၊ fluorescence ပြင်းထန်မှုသည် DNA စုဆောင်းမှုနှင့် တိုက်ရိုက်အချိုးကျပါသည်။ဆဲလ်တစ်ခုတည်း၏ fluorescence intensity ကွာခြားချက်များသည် ဆဲလ်လည်ပတ်မှု၏အမှန်တကယ်အခြေအနေကို MCF 7 ဆဲလ်များ၏ 4μM ၏ Nocodazole ဖြင့် ကုသခြင်းဖြစ်ပြီး ယင်းဆဲလ်များကို ၎င်းတို့၏ဆဲလ်လည်ပတ်မှု၏မတူညီသောအဆင့်များတွင် ဖမ်းဆီးရန်ဖြစ်သည်။ဤစမ်းသပ်မှုအခြေအနေအတွင်း ရရှိထားသော တောက်ပသောအကွက်ပုံများသည် ကျွန်ုပ်တို့အား ဆဲလ်တစ်ခုစီကို ခွဲခြားသိရှိနိုင်စေပါသည်။Countstar Rigel ၏ PI fluorescence ချန်နယ်သည် ဆဲလ်တစ်ခုတည်းတွင်ပင် DNA အချက်ပြမှုများကို ခွဲခြားသတ်မှတ်သည်။FCS ကို အသုံးပြု၍ အလင်းဖြာပြင်းအားများကို အသေးစိတ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်သည်။

CD Marker
CD အမှတ်အသား

CD Marker Phenotyping၊ Countstar Rigel မော်ဒယ်များသည် ဆဲလ်များ၏ immuno-based phenotyping ပိုထိရောက်စေရန် ပိုမိုမြန်ဆန်၊ ရိုးရှင်းပြီး ပိုမို ထိလွယ်ရှလွယ် ချဉ်းကပ်မှုကို ပေးဆောင်ပါသည်။မြင့်မားသောကြည်လင်ပြတ်သားသောရုပ်ပုံများနှင့် အစွမ်းထက်သောပေါင်းစပ်ဒေတာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုစွမ်းရည်များဖြင့် Countstar Rigel သည် အသုံးပြုသူများအား ရှုပ်ထွေးသောထိန်းချုပ်မှုဆက်တင်များနှင့် fluorescence လျော်ကြေးချိန်ညှိမှုများမလိုအပ်ဘဲ တသမတ်တည်းယုံကြည်စိတ်ချရသောရလဒ်များကိုရရှိစေရန်ခွင့်ပြုပါသည်။

Cytokine Induced Killer (CIK) ဆဲလ်ကွဲပြားမှုသည် Countstar Rigel ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသူ၏ စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အတန်းအစား cytometers များနှင့် တိုက်ရိုက်နှိုင်းယှဉ်ခြင်းဖြင့် ထူးချွန်သောစွမ်းဆောင်ရည်ကို ပြသသည်။ယဉ်ကျေးမှုရှိ မောက်စ်များ၏ PBMC များကို CD3-FITC၊ CD4-PE၊ CD8-PE နှင့် CD56-PE တို့ဖြင့် စွန်းထင်းခဲ့ပြီး Interleukin (IL) 6 မှ လှုံ့ဆော်ပေးသည်။ ထို့နောက် Countstar® Rigel နှင့် Flow Cytometry တို့နှင့် တပြိုင်နက် ခွဲခြမ်းစိပ်ဖြာခဲ့သည်။ဤစမ်းသပ်မှုတွင်၊ CD3-CD4၊ CD3-CD8 နှင့် CD3-CD56 ကို ကွဲပြားသောဆဲလ်လူဦးရေအချိုးအစားကိုဆုံးဖြတ်ရန် အုပ်စုသုံးစုခွဲထားသည်။

Degenerated Cells
Degenerated Cells များ

Immunofluorescence ဖြင့် Degenerated Cells များကို စစ်ဆေးခြင်း ၊ ဆဲလ်လိုင်းများထုတ်လုပ်သော Monoclonal antibodies များသည် ဆဲလ်များ ကြီးထွားခြင်းနှင့် ပြိုကွဲခြင်း သို့မဟုတ် မျိုးရိုးဗီဇ ပြောင်းလဲမှုများကြောင့် ဆဲလ်များကြီးထွားခြင်းနှင့် ဖြတ်သန်းစဉ်အတွင်း အပြုသဘောဆောင်သော clones အချို့ ဆုံးရှုံးပါမည်။ဆုံးရှုံးမှုပိုများခြင်းသည် ကုန်ထုတ်လုပ်ငန်း၏ ကုန်ထုတ်စွမ်းအားကို သိသိသာသာ ထိခိုက်စေမည်ဖြစ်သည်။ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်းသည် ပဋိပစ္စည်းများ၏ အထွက်နှုန်းကို အကောင်းဆုံးအဖြစ်သို့ ကူးပြောင်းရန်အတွက် လုပ်ငန်းစဉ်ထိန်းချုပ်မှုတွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပါသည်။

BioPharma လုပ်ငန်းတွင် ထုတ်လုပ်သော ပဋိပစ္စည်းအများစုကို Countstar Rigel စီးရီးမှ immunofluorescence တံဆိပ်တပ်ခြင်းဖြင့် ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်ပြီး အရေအတွက်အလိုက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်ပါသည်။အောက်ဖော်ပြပါ တောက်ပသောအကွက်နှင့် မီးချောင်းချန်နယ်ပုံများသည် လိုချင်သောပဋိပစ္စည်းထုတ်လုပ်ရန် ၎င်းတို့၏ဂုဏ်ရည်ကို ဆုံးရှုံးသွားသော ထိုကိုယ်လုံးများကို ရှင်းလင်းစွာပြသသည်။DeNovo FCS Express Image software ဖြင့် ပိုမိုအသေးစိတ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာလေလေ၊ ဆဲလ်အားလုံး၏ 86.35% သည် immunoglobulins ကိုဖော်ပြနေပြီး 3.34% ကသာ အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်ကြောင်း ထင်ရှားပါသည်။

Cell Counting
ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်း။

Trypan (အပြာဖြင့်စာလုံးကြီး B) ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်း၊ Trypan အပြာရောင်အရောင်ခြယ်ခြင်းကို ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုဓာတ်ခွဲခန်းအများစုတွင် အသုံးပြုဆဲဖြစ်သည်။

Trypan Blue Viability နှင့် Cell Density BioApp ကို Countstar Rigel မော်ဒယ်များအားလုံးတွင် ထည့်သွင်းနိုင်ပါသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ ကာကွယ်ထားသော ရုပ်ပုံအသိအမှတ်ပြုခြင်းဆိုင်ရာ အယ်လဂိုရီသမ်များသည် တွေ့ရှိသည့်အရာတစ်ခုစီကို အမျိုးအစားခွဲရန် ကန့်သတ်ဘောင် 20 ကျော်ကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာပါသည်။

Cell Line
ဆဲလ်လိုင်း

ဆဲလ်လိုင်းသိုလှောင်မှု QC၊ ဆဲလ်သိုလှောင်မှုတွင်၊ ခေတ်မီဆန်းသစ်သော အရည်အသွေးစီမံခန့်ခွဲမှု အယူအဆသည် ဆဲလ်လူလာထုတ်ကုန်အားလုံးကို ဘေးကင်းပြီး ထိရောက်စွာ စောင့်ကြည့်စစ်ဆေးခြင်းကို သေချာစေသည်။၎င်းသည် စမ်းသပ်မှုများ၊ လုပ်ငန်းစဉ် ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုနှင့် ထုတ်လုပ်မှုအတွက် တည်ငြိမ်သော ဆဲလ်အရည်သွေးကို အာမခံသည်၊

Countstar Rigel သည် အချင်း၊ ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် စုစည်းမှုကဲ့သို့သော ဆဲလ်လူလာအရာဝတ္ထုများ၏ အမျိုးမျိုးသော ပုံသဏ္ဍာန်လက္ခဏာများကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာကာ မြင့်မားသော Resolution ပုံများကို ရယူသည်။မတူညီသော လုပ်ငန်းစဉ်အဆင့်ဆင့်၏ ပုံများကို တစ်ခုနှင့်တစ်ခု အလွယ်တကူ နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ထို့ကြောင့် ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် စုစည်းမှုပုံစံကွဲလွဲမှုများကို ပုဂ္ဂလဒိဋ္ဌိလူ့တိုင်းတာမှုများကို ရှောင်ရှားခြင်းဖြင့် အလွယ်တကူ ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သည်။ထို့အပြင် Countstar Rigel ဒေတာဘေ့စ်တွင် ရုပ်ပုံများနှင့် ဒေတာများကို သိမ်းဆည်းခြင်းနှင့် ပြန်လည်ရယူခြင်းအတွက် ခေတ်မီဆန်းသစ်သော စီမံခန့်ခွဲမှုစနစ်တစ်ခု ရှိသည်။

အကြံပြုထားသော ထုတ်ကုန်များ

ဆက်စပ်အရင်းအမြစ်များ

သင့်ကိုယ်ရေးကိုယ်တာသည် ကျွန်ုပ်တို့အတွက် အရေးကြီးပါသည်။

ကျွန်ုပ်တို့၏ဝဘ်ဆိုက်များကိုလည်ပတ်သည့်အခါ သင့်အတွေ့အကြုံကိုမြှင့်တင်ရန် ကွတ်ကီးများကို ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုသည်- စွမ်းဆောင်ရည်ကွတ်ကီးများသည် ဤဝဘ်ဆိုက်ကို သင်မည်သို့အသုံးပြုကြောင်းပြသသည်၊ လုပ်ဆောင်နိုင်သော ကွတ်ကီးများသည် သင့်စိတ်ကြိုက်ရွေးချယ်မှုများကို မှတ်သားထားပြီး သင်နှင့်သက်ဆိုင်သည့်အကြောင်းအရာများကို မျှဝေရန် ကျွန်ုပ်တို့အား စွမ်းဆောင်မှုကွတ်ကီးများက ကူညီပေးပါသည်။

လက်ခံပါတယ်။

လော့ဂ်အင်