Dubbelfluorescensviabilitet (AO/PI), Akridinorange (AO) och propidiumjodid (PI) är nukleär nukleinfärgning och syrabindande färgämnen.AO kan penetrera membranet hos både döda och levande celler och färgar kärnan, vilket genererar en grön fluorescens.Däremot kan PI bara tränga igenom de sönderfallande membranen hos döda kärnförsedda celler och generera röd fluorescens.Den bildbaserade tekniken i Countstar Rigel utesluter cellfragment, skräp och artefaktpartiklar samt underdimensionerade händelser som blodplättar, vilket ger ett mycket exakt resultat.Sammanfattningsvis kan Countstar Rigel-systemet användas för varje steg i celltillverkningsprocessen.

T/NK-cellförmedlad cytotoxicitet, I den nyligen FDA-godkända CAR-T-cellterapin binder genetiskt modifierade T-lymfocyter specifikt till de riktade cancercellerna (T) och dödar dem.Countstar Rigel-analysatorerna kan analysera denna kompletta process av T/NK-cellförmedlad cytotoxicitet.

Cytotoxicitetsstudier utförs genom att märka målcancercellerna med CFSE eller transfektera dem med GFP.Hoechst 33342 kan användas för att färga alla celler (både T-celler och tumörceller).Alternativt kan måltumörceller färgas med CFSE.Propidiumjodid (PI) används för att färga döda celler (både T-celler och tumörceller).Diskriminering mellan olika celler kan erhållas med denna färgningsstrategi.

GFP-transfektionseffektivitet, inom molekylär genetik, olika modellorganismer och cellbiologi, används GFP-genen ofta som reporter för expressionsstudier.För närvarande använder forskare vanligtvis fluorescerande mikroskop eller flödescytometrar för att analysera transfektionseffektiviteten hos däggdjursceller.Men att hantera den komplexa tekniken hos en avancerad flödescytometer kräver en erfaren och högt kvalificerad operatör.Countstar Rigel gör det möjligt för användare att enkelt och exakt utföra en transfektionseffektivitetsanalys utan de drifts- och underhållskostnader som är förknippade med traditionell flödescytometri.

Cellapoptos, framstegen för cellapoptos kan övervakas med FITC-konjugerad Annexin-V i kombination med 7-ADD.Fosfatidylserin (PS)-rester är normalt belägna på insidan av plasmamembranet hos friska celler.Under tidig apoptos går membranintegriteten förlorad och PS kommer att translokeras till utsidan av cellmembranet.Annexin V har en stark affinitet till PS och är därför den idealiska markören för tidiga apoptotiska celler.

Cellcykel, under celldelning innehåller celler ökade mängder DNA.Märkt av PI är en ökning av fluorescensintensiteten direkt proportionell mot en ackumulering av DNA.Skillnaderna i fluorescensintensiteterna för de enskilda cellerna är indikatorerna på den faktiska statusen för cellcykeln. MCF 7-celler behandlades med 4μM Nocodazol för att stoppa dessa celler i olika stadier av deras cellcykel.De ljusfältsbilder som förvärvats under detta testscenario tillåter oss att identifiera varje enskild cell.PI-fluorescenskanalen i Countstar Rigel identifierar DNA-signalerna från enstaka celler även i aggregat.En detaljerad analys av fluorescensintensiteterna kan utföras med användning av FCS.

CD Marker Fenotyping, Countstar Rigel-modellerna erbjuder en snabbare, enklare och mer känslig metod för, effektivare immunbaserad fenotypning av celler.Med högupplösta bilder och kraftfulla integrerade dataanalysfunktioner tillåter Countstar Rigel användare att uppnå konsekvent tillförlitliga resultat utan behov av omfattande komplexa kontrollinställningar och fluorescenskompensationsjusteringar.

Cytokine Induced Killer (CIK) celldifferentiering visar den enastående prestandakvaliteten hos Countstar Rigel-analysatorn i direkt jämförelse med högklassiga flödescytometrar.PBMC från mus i kultur färgades med CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE och CD56-PE och inducerades av Interleukin (IL) 6. Analyserades sedan samtidigt med Countstar® Rigel och flödescytometri.I detta test delades CD3-CD4, CD3-CD8 och CD3-CD56 in i tre grupper för att bestämma andelen olika cellsubpopulationer.

Detektering av degenererade celler genom immunfluorescens, monoklonala antikroppar som producerar cellinjer kommer att förlora några positiva kloner under cellproliferation och passage på grund av nedbrytning eller genetiska mutationer.En högre förlust kommer att avsevärt påverka produktiviteten i tillverkningsprocessen.Övervakningen av nedbrytningen spelar en viktig roll i processkontrollen för att förskjuta utbytet av antikroppar till det optimala.

De flesta antikroppar som tillverkas i BioPharma-industrin kan detekteras genom immunfluorescensmärkning och analyseras kvantitativt av Countstar Rigel-serien.Ljusfälts- och fluorescenskanalbilderna nedan visar tydligt de kloner som förlorade sin egenskap för att producera de önskade antikropparna.Den mer detaljerade analysen med programvaran DeNovo FCS Express Image bekräftar att 86,35 % av alla celler uttrycker immunglobulinerna, endast 3,34 % är klart negativa.

Trypan (bokstav B i blått) Cellräkning, trypanblå färgning används fortfarande i de flesta cellodlingslaboratorier.

Trypan Blue Viability and Cell Density BioApp kan installeras på alla Countstar Rigel-modeller.Våra skyddade bildigenkänningsalgoritmer analyserar mer än 20 parametrar för att klassificera varje enskilt objekt som upptäcks.

Cell Line Storage QC, In cell storage, ett sofistikerat kvalitetsledningskoncept säkerställer säker, effektiv övervakning av alla cellulära produkter.Detta garanterar den stabila kvaliteten på cell kryokonserverad, kryokonserverad för experiment, processutveckling och produktion.

Countstar Rigel tar högupplösta bilder och analyserar olika morfologiska egenskaper hos de cellulära objekten såsom diameter, form och aggregeringstendens.Bilder av olika processsteg kan enkelt jämföras med varandra.Så variationer i form och aggregering kan lätt upptäckas genom att undvika subjektiva mänskliga mätningar.Och databasen Countstar Rigel har ett sofistikerat hanteringssystem för lagring och hämtning av bilder och data.