La viabilitat de fluorescència dual (AO/PI), la taronja d'acridina (AO) i el iodur de propidi (PI) són tincions nucleiques nuclears i colorants d'unió àcids.AO pot penetrar a la membrana de les cèl·lules mortes i vives i tacar el nucli, generant una fluorescència verda.En canvi, el PI només pot impregnar les membranes en desintegració de les cèl·lules nucleades mortes, generant fluorescència vermella.La tecnologia basada en imatges del Countstar Rigel exclou fragments cel·lulars, restes i partícules d'artefactes, així com esdeveniments de mida inferior com les plaquetes, donant un resultat molt precís.En conclusió, el sistema Countstar Rigel es pot utilitzar per a cada pas del procés de fabricació de cèl·lules.

Citotoxicitat mediada per cèl·lules T/NK, a la teràpia amb cèl·lules CAR-T recentment aprovada per la FDA, els limfòcits T modificats genèticament s'uneixen específicament a les cèl·lules canceroses (T) dirigides i les maten.Els analitzadors Countstar Rigel són capaços d'analitzar aquest procés complet de citotoxicitat mediada per cèl·lules T/NK.

Els estudis de citotoxicitat es realitzen etiquetant les cèl·lules canceroses diana amb CFSE o transfectant-les amb GFP.Hoechst 33342 es pot utilitzar per tenyir totes les cèl·lules (tant cèl·lules T com cèl·lules tumorals).Alternativament, les cèl·lules tumorals diana es poden tacar amb CFSE.El iodur de propidi (PI) s'utilitza per tenyir cèl·lules mortes (tant cèl·lules T com cèl·lules tumorals).La discriminació entre diferents cèl·lules es pot obtenir mitjançant aquesta estratègia de tinció.

Eficiència de transfecció de GFP, en genètica molecular, diversos organismes model i biologia cel·lular, el gen GFP s'utilitza freqüentment com a reporter per a estudis d'expressió.Actualment, els científics utilitzen habitualment microscopis fluorescents o citòmetres de flux per analitzar l'eficiència de transfecció de cèl·lules de mamífers.Però manejar la complexa tecnologia d'un citòmetre de flux avançat requereix un operador experimentat i altament qualificat.Countstar Rigel permet als usuaris realitzar un assaig d'eficiència de transfecció amb facilitat i precisió sense els costos d'operació i manteniment associats a la citometria de flux tradicional.

Apoptosi cel·lular, el progrés de l'apoptosi cel·lular es pot controlar mitjançant Annexina-V conjugada amb FITC en combinació amb 7-ADD.Els residus de fosfatidilserina (PS) es troben normalment a la cara interna de la membrana plasmàtica de les cèl·lules sanes.Durant l'apoptosi primerenca, la integritat de la membrana es perd i el PS es traslladarà a l'exterior de la membrana cel·lular.L'annexina V té una forta afinitat amb PS i, per tant, és el marcador ideal per a les cèl·lules apoptòtiques primerenques.

Cicle cel·lular, durant la divisió cel·lular, les cèl·lules contenen quantitats més grans d'ADN.Marcat per PI, un augment de la intensitat de la fluorescència és directament proporcional a una acumulació d'ADN.Les diferències en les intensitats de fluorescència de les cèl·lules individuals són els indicadors de l'estat real del cicle cel·lular. Les cèl·lules MCF 7 es van tractar amb 4μM de Nocodazol per aturar aquestes cèl·lules en diferents etapes del seu cicle cel·lular.Les imatges de camp clar adquirides durant aquest escenari de prova ens permeten identificar cada cèl·lula individual.El canal de fluorescència PI del Countstar Rigel identifica els senyals d'ADN de cèl·lules individuals fins i tot en agregats.Es pot realitzar una anàlisi detallada de les intensitats de fluorescència mitjançant el FCS.

Fenotipat de CD Marker, els models Countstar Rigel ofereixen un enfocament més ràpid, més senzill i més sensible per al fenotipat de cèl·lules basat en la immunitat més eficient.Amb imatges d'alta resolució i potents capacitats d'anàlisi de dades integrades, el Countstar Rigel permet als usuaris aconseguir resultats fiables de manera constant sense necessitat d'ajustos de control complexos i ajustos de compensació de fluorescència.

La diferenciació cel·lular de Cytokine Induced Killer (CIK) demostra la qualitat de rendiment excepcional de l'analitzador Countstar Rigel en comparació directa amb els citòmetres de flux d'alta classe.Les PBMC de ratolí en cultiu es van tacar amb CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE i CD56-PE, i es van induir per Interleukin (IL) 6. Després es van analitzar simultàniament amb Countstar® Rigel i citometria de flux.En aquesta prova, el CD3-CD4, el CD3-CD8 i el CD3-CD56 es van dividir en tres grups, per determinar la proporció de diferents subpoblacions cel·lulars.

Detecció de cèl·lules degenerades per immunofluorescència, els anticossos monoclonals que produeixen línies cel·lulars perdran alguns clons positius durant la proliferació i el pas cel·lular a causa de la degradació o mutacions genètiques.Una pèrdua més alta afectarà significativament la productivitat del procés de fabricació.El seguiment de la degradació té un paper important en el control del procés per canviar el rendiment d'anticossos a l'òptim.

La majoria dels anticossos fabricats a la indústria BioPharma es poden detectar mitjançant l'etiquetatge d'immunofluorescència i analitzats quantitativament per la sèrie Countstar Rigel.Les imatges de camp brillant i del canal de fluorescència a continuació mostren clarament aquells clons que van perdre el seu atribut per produir els anticossos desitjats.L'anàlisi més detallada amb el programari DeNovo FCS Express Image confirma que el 86,35% de totes les cèl·lules expressen les immunoglobulines, només el 3,34% són clarament negatives.

Recompte de cèl·lules tripà (majúscules B en blau), la tinció de blau tripà encara s'utilitza a la majoria de laboratoris de cultiu cel·lular.

La BioApp de viabilitat i densitat cel·lular de Trypan Blue es pot instal·lar a tots els models Countstar Rigel.Els nostres algorismes de reconeixement d'imatges protegides analitzen més de 20 paràmetres per classificar cada objecte detectat.

Cell Line Storage QC, a l'emmagatzematge cel·lular, un concepte sofisticat de gestió de la qualitat garanteix un control segur i eficient de tots els productes cel·lulars.Això garanteix la qualitat estable de les cèl·lules criopreservades, criopreservades per a experiments, desenvolupament de processos i producció.

El Countstar Rigel adquireix imatges d'alta resolució, analitzant diverses característiques morfològiques dels objectes cel·lulars, com ara el diàmetre, la forma i la tendència a l'agregació.Les imatges de diferents passos del procés es poden comparar fàcilment entre si.Així, les variacions en la forma i l'agregació es poden detectar fàcilment, evitant mesures humanes subjectives.I la base de dades Countstar Rigel disposa d'un sistema de gestió sofisticat per a l'emmagatzematge i la recuperació d'imatges i dades.