Shtëpi » Burimet » Përqendrimi i drejtpërdrejtë, qëndrueshmëria dhe matja e fenotipit të qelizave staminale duke përdorur një citomet të ri imazherie

Përqendrimi i drejtpërdrejtë, qëndrueshmëria dhe matja e fenotipit të qelizave staminale duke përdorur një citomet të ri imazherie

Abstrakt: Qelizat staminale mezenkimale janë një nëngrup i qelizave staminale pluripotente që mund të izolohen nga mesoderma.Me karakteristikat e tyre të ripërtëritjes së vetë-përsëritjes dhe diferencimit me shumë drejtime, ato posedojnë një potencial të lartë për terapi të ndryshme në mjekësi.Qelizat staminale mezenkimale kanë një fenotip unik imunitar dhe aftësi rregulluese imune.Prandaj, qelizat burimore mezenkimale tashmë përdoren gjerësisht në transplantimin e qelizave burimore, inxhinierinë e indeve dhe transplantimin e organeve.Dhe përtej këtyre aplikacioneve, ato përdoren si një mjet ideal në inxhinierinë e indeve si qeliza mbjellëse në një seri eksperimentesh kërkimore bazë dhe klinike.Deri më tani, nuk ka një metodë dhe standard të pranuar gjerësisht për kontrollin e cilësisë së qelizave staminale mezenkimale.Countstar Rigel mund të monitorojë përqendrimin, qëndrueshmërinë dhe karakteristikat e fenotipit (dhe ndryshimet e tyre) gjatë prodhimit dhe diferencimit të këtyre qelizave burimore.Countstar Rigel ka gjithashtu avantazhin në marrjen e informacionit morfologjik shtesë, të siguruar nga regjistrimet e imazhit të përhershëm të dritës dhe fluoreshencës gjatë gjithë procesit të monitorimit të cilësisë së qelizave.Countstar Rigel ofron një metodë të shpejtë, të sofistikuar dhe të besueshme për kontrollin e cilësisë së qelizave staminale.

Materiale dhe metoda:
Qelizat burimore mezenkimale me prejardhje nga dhjami (AdMSCs) u dhuruan nga Profesor Nianmin Qi, solucioni i ngjyrosjes AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antitrupat: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC-të u kultivuan në një inkubator të lagështuar me 37℃, 5% CO2.Tretet me tripsinë para përdorimit.
Procedura e ngjyrosjes së markerit CD u ndoq si manual i antitrupave.
Zbulimi i shënuesit të CD me Countstar Rigel:
1. U krijua një procedurë e aplikimit të ngjyrës së sinjalit duke vendosur kanalin PE për të imazhuar fluoreshencën PE.
2. Nga secila dhomë u kapën 3 fusha.
3. Pas përfundimit të imazhit dhe analizës fillestare, vendosja e pragut (log gate) për transfeksion pozitiv dhe negativ u vendos nga softueri FCS.

Kontrolli i cilësisë së qelizave staminale
Figura e mëposhtme (Figura 1) tregon procedurën e terapi me qeliza staminale .

Figura 1: Procedura për terapinë e qelizave staminale

Rezultatet:
Përcaktimi i përqendrimit, qëndrueshmërisë, diametrit dhe grumbullimit të AdMSC-ve.
Qëndrueshmëria e AdMSC-ve u përcaktua nga AO/PI. Një procedurë aplikimi me dy ngjyra u krijua duke vendosur kanalin jeshil dhe kanalin e kuq në imazhin e fluoreshencës AO dhe PI, plus një fushë të ndritshme.Shembuj të imazheve janë paraqitur në Figurën 2.

Figura 2. Imazhet e para transportit dhe pas transportit të AdMSC-ve.A. Para transportit;shfaqet një imazh përfaqësues.B. Pas transportit;shfaqet një imazh përfaqësues.

Qëndrueshmëria e AdMSC-ve u ndryshua në mënyrë drastike pas transportit në krahasim me para transportit.Qëndrueshmëria para transportit ishte 92%, por u ul në 71% pas transportit.Rezultati u tregua në Figurën 3.

Figura 3. Rezultatet e qëndrueshmërisë së AdMSC-ve (Para transportit dhe pas transportit)

Diametri dhe grumbullimi u përcaktuan gjithashtu nga Countstar Rigel.Diametri i AdMSC-ve u ndryshua në mënyrë drastike pas transportit në krahasim me para transportit.Diametri para transportit ishte 19µm, por u rrit në 21µm pas transportit.Grumbullimi i para transportit ishte 20%, por u rrit në 25% pas transportit.Nga imazhet e kapura nga Countstar Rigel, fenotipi i AdMSC-ve u ndryshua në mënyrë drastike pas transportit.Rezultatet u treguan në Figurën 4.

Figura 4: Diametri dhe rezultatet e grumbullimit.Përgjigje: Imazhet përfaqësuese të AdMSC-ve, fenotipi i AdMSC-ve u ndryshuan në mënyrë drastike pas transportit.B: Grumbullimi para transportit ishte 20%, por u rrit në 25% pas transportit.C: Diametri para transportit ishte 19µm, por u rrit në 21µm pas transportit.

Përcaktoni imunofenotipin e AdMSCs nga Countstar Rigel
Imunofenotipi i AdMSC-ve u përcaktua nga Countstar Rigel, AdMSC-të u inkubuan përkatësisht me antitrupa të ndryshëm (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Një procedurë aplikimi me ngjyrë sinjali u krijua duke vendosur një kanal të gjelbër për të imazhuar fluoreshencën PE, plus një fushë të ndritshme.Segmentimi i referencës së figurës së fushës së ndritshme u aplikua si një maskë për të kampionuar sinjalin e fluoreshencës PE.Rezultatet e CD105 u treguan (Figura 5).

Figura 5: Rezultatet e CD105 të AdMSC-ve u përcaktuan nga Countstar Rigel.A: Analiza sasiore e përqindjes pozitive të CD105 në mostra të ndryshme nga softueri FCS Express 5 plus.B: Imazhet me cilësi të lartë ofrojnë informacion shtesë morfologjik.C: Rezultatet e vërtetuara sipas miniaturës së çdo qelize të vetme, mjetet softuerike FCS i ndanë qelizat në grupe të ndryshme sipas shprehjes së tyre të ndryshme të proteinave.

 

Rezultatet e tjera të antitrupave u treguan në Fig 6

Figura 6: A: Një imazh përfaqësues i ASC-ve me morfologji tipike në formë gishti.E kapur nga mikroskopi OLYMPUS.Zmadhimi origjinal, (10x).B: Diferencimi adipogjen i ASC-ve evidentohet nga ngjyrosja me Rutenium Red që tregon zona të mineralizimit.E kapur nga mikroskopi OLYMPUS.Zmadhimi origjinal (10x).C: Karakterizimi i Countstar FL i ASC-ve.

Përmbledhje:
Countstar FL mund të monitorojë përqendrimin, qëndrueshmërinë dhe karakteristikat e fenotipit (dhe ndryshimet e tyre) gjatë prodhimit dhe diferencimit të këtyre qelizave burimore.FCS Express siguron funksionin për të rishikuar çdo qelizë sinjali, për të vërtetuar të dhënat përmes imazhit.Përdoruesi mund të ketë gjithashtu besimin për të kryer eksperimentet e ardhshme bazuar në rezultatet e Countstar Rigel.Countstar Rigel ofron një metodë të shpejtë, të sofistikuar dhe të besueshme për kontrollin e cilësisë së qelizave staminale.

 

Shkarko

Shkarkimi i skedarit

  • 这个字段是用于验证目的,应该保持不变。

Privatësia juaj është e rëndësishme për ne.

Ne përdorim cookie për të përmirësuar përvojën tuaj kur vizitoni faqet tona të internetit: skedarët e performancës na tregojnë se si e përdorni këtë faqe interneti, kukit funksionale kujtojnë preferencat tuaja dhe skedarët e synuar na ndihmojnë të ndajmë përmbajtje të rëndësishme për ju.

Pranoje

Identifikohu