Анатацыя: Мезенхімальныя ствалавыя клеткі ўяўляюць сабой падгрупу плюрыпатэнтных ствалавых клетак, якія можна вылучыць з мезадэрмы.З іх характарыстыкамі самарэплікацыі і дыферэнцыявання ў розных напрамках, яны валодаюць высокім патэнцыялам для розных метадаў лячэння ў медыцыне.Мезенхімальныя ствалавыя клеткі маюць унікальны імунны фенатып і здольнасць імуннай рэгуляцыі.Такім чынам, мезенхімальныя ствалавыя клеткі ўжо шырока выкарыстоўваюцца ў трансплантацыі ствалавых клетак, тканкавай інжынерыі і трансплантацыі органаў.Акрамя гэтых прыкладанняў, яны выкарыстоўваюцца ў якасці ідэальнага інструмента ў тканкавай інжынерыі ў якасці сеяльных клетак у серыі фундаментальных і клінічных даследчых эксперыментаў.Да гэтага часу не існуе шырока прызнанага метаду і стандарту для кантролю якасці мезенхімальных ствалавых клетак.Countstar Rigel можа кантраляваць канцэнтрацыю, жыццяздольнасць і характарыстыкі фенатыпу (і іх змены) падчас вытворчасці і дыферэнцыявання гэтых ствалавых клетак.Countstar Rigel таксама мае перавагу ў атрыманні дадатковай марфалагічнай інфармацыі, якая забяспечваецца пастаянным яркім полем і запісамі малюнкаў на аснове флуарэсцэнцыі на працягу ўсяго працэсу маніторынгу якасці клетак.Countstar Rigel прапануе хуткі, складаны і надзейны метад кантролю якасці ствалавых клетак.
Матэрыялы і метады:
Мезенхімальныя ствалавыя клеткі, атрыманыя з тлушчавай тканіны (AdMSCs), былі дараваны прафесарам Няньмінь Ці, растворам для афарбоўвання AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Антыцелы: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (кампанія BD).
AdMSC культывуюцца ў інкубатары з увільготненым 37 ℃ 5% CO2.Перад ужываннем пераварваюць трыпсінам.
Працэдура афарбоўвання CD-маркераў выконвалася як кіраўніцтва па антыцелах.
Выяўленне CD-маркера з дапамогай Countstar Rigel:
1. Працэдура прымянення колеру сігналу была створана шляхам ўстаноўкі канала PE для выявы флуоресценции PE.
2. З кожнай камеры было захоплена 3 палі.
3. Пасля таго, як візуалізацыя і першапачатковы аналіз былі завершаны, парогавыя (логарифмічныя вароты) настройкі для станоўчай і адмоўнай трансфекции былі ўстаноўлены праграмным забеспячэннем FCS.
Кантроль якасці ствалавых клетак
Наступны малюнак (малюнак 1) паказвае працэдуру тэрапія ствалавымі клеткамі .
Малюнак 1: Працэдура тэрапіі ствалавымі клеткамі
Вынікі:
Вызначэнне канцэнтрацыі, жыццяздольнасці, дыяметра і агрэгацыі AdMSC.
Жыццяздольнасць AdMSCs вызначалася з дапамогай AO/PI. Працэдура нанясення двух колераў была створана шляхам наладкі зялёнага канала і чырвонага канала на выяву AO і PI флуарэсцэнцыі, а таксама яркага поля.Прыкладныя выявы былі паказаны на малюнку 2.
Малюнак 2. Выявы перад транспарціроўкай і пасля транспарціроўкі AdMSC.A. Да транспарціроўкі;паказаны рэпрэзентатыўны малюнак.B. Пасля транспарціроўкі;паказаны рэпрэзентатыўны малюнак.
Жыццяздольнасць AdMSC рэзка змянілася пасля транспарціроўкі ў параўнанні з да транспарціроўкай.Жыццяздольнасць да транспарціроўкі складала 92%, але пасля транспарціроўкі яна знізілася да 71%.Вынік быў паказаны на малюнку 3.
Малюнак 3. Вынікі жыццяздольнасці AdMSC (да транспарціроўкі і пасля транспарціроўкі)
Дыяметр і агрэгацыя былі таксама вызначаны Countstar Rigel.Дыяметр AdMSC быў рэзка зменены пасля транспарціроўкі ў параўнанні з да транспарціроўкі.Дыяметр да транспарціроўкі быў 19 мкм, але пасля транспарціроўкі ён павялічыўся да 21 мкм.Агрэгацыя да транспарціроўкі складала 20%, але пасля транспарціроўкі яна павялічылася да 25%.З здымкаў, зробленых Countstar Rigel, фенатып AdMSC быў рэзка зменены пасля транспарціроўкі.Вынікі паказаны на малюнку 4.
Малюнак 4: Дыяметр і вынікі агрэгацыі.A: Рэпрэзентатыўныя выявы AdMSC, фенатып AdMSC былі рэзка зменены пасля транспарціроўкі.B: Агрэгацыя да транспарціроўкі складала 20%, але пасля транспарціроўкі яна павялічылася да 25%.C: Дыяметр да транспарціроўкі быў 19 мкм, але пасля транспарціроўкі ён павялічыўся да 21 мкм.
Вызначыць імунафенатып AdMSC па Countstar Rigel
Імунафенатып AdMSCs вызначалі Countstar Rigel, AdMSCs інкубавалі з рознымі антыцеламі адпаведна (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Працэдура прымянення колеру сігналу была створана шляхам ўстаноўкі зялёнага канала для адлюстравання флуоресценции PE, а таксама яркага поля.Яркае поле апорнай сегментацыі карціны была ўжытая ў якасці маскі для выбаркі сігналу флуоресценции PE.Былі паказаны вынікі CD105 (малюнак 5).
Малюнак 5: Вынікі CD105 AdMSC былі вызначаны Countstar Rigel.A: Колькасны аналіз станоўчага адсотка CD105 у розных узорах з дапамогай праграмнага забеспячэння FCS Express 5 plus.B: высакаякасныя выявы забяспечваюць дадатковую марфалагічную інфармацыю.C: Правераныя вынікі па мініяцюрах кожнай асобнай клеткі, праграмныя сродкі FCS падзялілі клеткі на розныя групы ў залежнасці ад іх рознай экспрэсіі бялку.
Іншыя вынікі антыцелаў паказаны на малюнку 6
Малюнак 6: A: Рэпрэзентатыўны малюнак ASC з тыповай верацянопадобнай марфалогіяй.Знятае мікраскопам OLYMPUS.Арыгінальнае павелічэнне (10x).B: Адипогенная дыферэнцыяцыя ASCs пацвярджаецца афарбоўваннем рутэніевым чырвоным, які паказвае вобласці мінералізацыі.Знятае мікраскопам OLYMPUS.Арыгінальнае павелічэнне (10x).C: Countstar FL характарыстыка ASC.
Рэзюмэ:
Countstar FL можа кантраляваць канцэнтрацыю, жыццяздольнасць і характарыстыкі фенатыпу (і іх змены) падчас вытворчасці і дыферэнцыявання гэтых ствалавых клетак.FCS express забяспечвае функцыю прагляду кожнай сігнальнай ячэйкі, праверкі дадзеных праз малюнак.Карыстальнік таксама можа мець упэўненасць у правядзенні наступных эксперыментаў на аснове вынікаў Countstar Rigel.Countstar Rigel прапануе хуткі, складаны і надзейны метад кантролю якасці ствалавых клетак.
