Xülasə: Mezenximal kök hüceyrələr mezodermadan təcrid oluna bilən pluripotent kök hüceyrələrin bir hissəsidir.Öz-özünə təkrarlanan yenilənmə və çox istiqamətli diferensiallaşma xüsusiyyətləri ilə tibbdə müxtəlif müalicələr üçün yüksək potensiala malikdirlər.Mezenximal kök hüceyrələr unikal immun fenotipə və immun tənzimləmə qabiliyyətinə malikdir.Buna görə də, mezenximal kök hüceyrələr artıq kök hüceyrə transplantasiyası, toxuma mühəndisliyi və orqan transplantasiyasında geniş istifadə olunur.Və bu tətbiqlərdən əlavə, bir sıra əsas və klinik tədqiqat təcrübələrində toxumçu hüceyrələr kimi toxuma mühəndisliyində ideal bir vasitə kimi istifadə olunur.Bu günə qədər mezenximal kök hüceyrələrin keyfiyyətinə nəzarət üçün geniş qəbul edilmiş metod və standart mövcud deyil.Countstar Rigel bu kök hüceyrələrin istehsalı və differensasiyası zamanı konsentrasiyanı, canlılığı və fenotip xüsusiyyətlərini (və onların dəyişikliklərini) izləyə bilər.Countstar Rigel həmçinin hüceyrə keyfiyyətinin monitorinqinin bütün prosesi zamanı daimi parlaq sahə və flüoresan əsaslı görüntü qeydləri ilə təmin edilən əlavə morfoloji məlumatların əldə edilməsində üstünlüyə malikdir.Countstar Rigel kök hüceyrələrin keyfiyyətinə nəzarət üçün sürətli, mürəkkəb və etibarlı üsul təklif edir.
Materiallar və metodlar:
Piydən əldə edilən mezenximal kök hüceyrələr (AdMSCs) AO/PI boyama məhlulu (Shanghai RuiYu, CF002) professor Nianmin Qi tərəfindən hədiyyə edilmişdir.Antikor: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Şirkəti).
AdMSCs 37 ℃, 5% CO2 nəmləndirilmiş inkubatorda becərildi.İstifadədən əvvəl tripsinlə həzm edin.
CD markerlə boyanma proseduru antikorun təlimatı kimi izlənildi.
Countstar Rigel ilə CD markerinin aşkarlanması:
1. PE kanalını şəkil PE floresansına təyin etməklə siqnal rənginin tətbiqi proseduru yaradılmışdır.
2. Hər kameradan 3 sahə ələ keçirildi.
3. Görüntüləmə və ilkin təhlil tamamlandıqdan sonra müsbət və mənfi transfeksiya üçün eşik həddi (log gate) FCS proqramı tərəfindən təyin edildi.
Kök hüceyrə keyfiyyətinə nəzarət
Aşağıdakı Şəkil (Şəkil 1) prosedurunu göstərir kök hüceyrə terapiyası .
Şəkil 1: Kök hüceyrə terapiyası proseduru
Nəticələr:
AdMSC-lərin konsentrasiyasının, canlılığının, diametrinin və aqreqasiyasının müəyyən edilməsi.
AdMSC-lərin həyat qabiliyyəti AO/PI tərəfindən müəyyən edildi, Yaşıl kanal və Qırmızı kanalı görüntü AO və PI floresansına, üstəlik parlaq sahəyə təyin etməklə iki rəngli tətbiq proseduru yaradıldı.Nümunə şəkillər Şəkil 2-də göstərilmişdir.
Şəkil 2. AdMSC-lərin daşınmadan əvvəl və daşınmasından sonrakı şəkilləri.A. Daşımadan əvvəl;təmsilçi şəkli göstərilir.B. Daşındıqdan sonra;təmsilçi şəkli göstərilir.
AdMSC-lərin həyat qabiliyyəti nəqliyyatdan əvvəlki ilə müqayisədə daşınmadan sonra kəskin şəkildə dəyişdi.Daşınmadan əvvəl həyat qabiliyyəti 92% idisə, daşındıqdan sonra 71% -ə qədər azaldı.Nəticə Şəkil 3-də göstərilmişdir.
Şəkil 3. AdMSC-lərin həyat qabiliyyətinin nəticələri (Daşımadan əvvəl və daşınmadan sonra)
Diametr və aqreqasiya da Countstar Rigel tərəfindən müəyyən edilmişdir.AdMSC-lərin diametri daşınmadan əvvəlki ilə müqayisədə daşındıqdan sonra kəskin şəkildə dəyişdi.Daşınmadan əvvəl diametri 19µm idi, lakin daşınmadan sonra 21µm-ə qədər artdı.Nəqliyyatdan əvvəl aqreqasiya 20% idisə, daşımadan sonra 25%-ə yüksəldi.Countstar Rigel tərəfindən çəkilən şəkillərdən AdMSC-lərin fenotipi daşındıqdan sonra kəskin şəkildə dəyişdi.Nəticələr Şəkil 4-də göstərilmişdir.
Şəkil 4: Diametr və toplama nəticələri.A: AdMSC-lərin təmsil şəkilləri, AdMSC-lərin fenotipi daşındıqdan sonra kəskin şəkildə dəyişdirildi.B: Nəqliyyatdan əvvəl aqreqasiya 20% idi, lakin daşınmadan sonra 25%-ə yüksəldi.C: Daşımadan əvvəl diametri 19µm idi, lakin daşındıqdan sonra 21µm-ə qədər artdı.
Countstar Rigel tərəfindən AdMSC-lərin immunofenotipini təyin edin
AdMSC-lərin immunofenotipi Countstar Rigel tərəfindən müəyyən edildi, AdMSC-lər müvafiq olaraq müxtəlif antikorlarla (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) inkubasiya edildi.Siqnal rənginin tətbiqi proseduru PE flüoresansını təsvir etmək üçün Yaşıl kanalı, üstəgəl parlaq sahəni təyin etməklə yaradılmışdır.PE flüoresan siqnalından nümunə götürmək üçün maska kimi parlaq sahə şəklinin istinad seqmentasiyası tətbiq edilmişdir.CD105-in nəticələri göstərilmişdir (Şəkil 5).
Şəkil 5: AdMSC-lərin CD105 nəticələri Countstar Rigel tərəfindən müəyyən edilmişdir.A: FCS express 5 plus proqramı ilə müxtəlif nümunələrdə CD105-in müsbət faizinin kəmiyyət təhlili.B: Yüksək keyfiyyətli şəkillər əlavə morfoloji məlumat verir.C: Hər bir hüceyrənin kiçik şəkilləri ilə təsdiqlənmiş nəticələr, FCS proqram alətləri hüceyrələri müxtəlif zülal ifadələrinə görə müxtəlif qruplara ayırdı.
Digər antikorların nəticələri Şəkil 6-da göstərilmişdir
Şəkil 6: A: Tipik mil formalı morfologiyaya malik ASC-lərin nümayəndəsi.OLYMPUS mikroskopu ilə çəkilib.Orijinal böyütmə, (10x).B: ASC-lərin adipogen diferensiasiyası minerallaşma sahələrini göstərən Rutenium Qırmızı boyanması ilə sübut olunur.OLYMPUS mikroskopu ilə çəkilib.Orijinal böyütmə (10x).C: ASC-lərin Countstar FL xarakteristikası.
Xülasə:
Countstar FL bu kök hüceyrələrin istehsalı və differensasiyası zamanı konsentrasiyaya, canlılığa və fenotip xüsusiyyətlərinə (və onların dəyişikliklərinə) nəzarət edə bilər.FCS express hər bir siqnal hüceyrəsini nəzərdən keçirmək, görüntü vasitəsilə məlumatları yoxlamaq funksiyasını təmin edir.İstifadəçi həmçinin Countstar Rigel-in nəticələrinə əsaslanaraq növbəti eksperimentləri həyata keçirmək üçün əmin ola bilər.Countstar Rigel kök hüceyrələrin keyfiyyətinə nəzarət üçün sürətli, mürəkkəb və etibarlı üsul təklif edir.
