Abstract: Ang mesenchymal stem cell usa ka subset sa pluripotent stem cells nga mahimong ibulag gikan sa mesoderm.Uban sa ilang pagbag-o sa kaugalingon nga replikasyon ug mga kinaiya sa pagkalainlain sa daghang direksyon, sila adunay taas nga potensyal alang sa lainlaing mga terapiya sa medisina.Ang mesenchymal stem cells adunay talagsaon nga immune phenotype ug abilidad sa immune regulation.Busa, ang mesenchymal stem cell kay kaylap na nga gigamit sa stem cell transplantation, tissue engineering, ug organ transplantation.Ug Labaw pa niini nga mga aplikasyon, sila gigamit ingon nga usa ka sulundon nga himan sa tissue engineering ingon seeder cells sa usa ka serye sa mga batakan ug klinikal nga mga eksperimento sa panukiduki.Hangtod karon, wala'y usa ka kaylap nga gidawat nga pamaagi ug sumbanan alang sa kalidad nga pagkontrol sa mesenchymal stem cells.Ang Countstar Rigel makamonitor sa konsentrasyon, viability, ug phenotype nga mga kinaiya (ug ang ilang mga pagbag-o) sa panahon sa paghimo ug pagkalainlain niini nga mga stem cell.Ang Countstar Rigel usab adunay bentaha sa pagkuha sa dugang nga morphological nga impormasyon, nga gihatag sa permanente nga brightfield ug fluorescence-based nga mga pagrekord sa imahe sa panahon sa tibuok proseso sa pag-monitor sa kalidad sa selula.Ang Countstar Rigel nagtanyag usa ka paspas, sopistikado, ug kasaligan nga pamaagi alang sa pagkontrol sa kalidad sa mga stem cell.
Mga materyales ug pamaagi:
Ang adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSCs) gihatagan ni Propesor Nianmin Qi, AO/PI staining solution (Shanghai RuiYu, CF002).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Ang mga AdMSC gikultura sa usa ka 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Digest sa trypsin sa dili pa gamiton.
Ang pamaagi sa pagmantsa sa CD marker gisunod isip manwal sa antibody.
CD marker detection uban sa Countstar Rigel:
1. Usa ka pamaagi sa aplikasyon nga kolor sa signal ang gihimo pinaagi sa pag-set sa PE channel sa imahe sa PE fluorescence.
2. 3 ka uma ang nailog gikan sa matag lawak.
3. Human makompleto ang imaging ug inisyal nga pagtuki, ang threshold (log gate) setting alang sa positibo ug negatibo nga transfection gitakda sa FCS software.
Pagkontrol sa kalidad sa stem cell
Ang mosunod nga Figure (Figure 1) nagpakita sa pamaagi sa therapy sa stem cell .
Figure 1: Ang pamaagi alang sa stem cell therapy
Resulta:
Pagtino sa konsentrasyon, viability, diametro, ug aggregation sa AdMSCs.
Ang viability sa AdMSCs gitino pinaagi sa AO/PI, Usa ka dual-kolor nga pamaagi sa aplikasyon gihimo pinaagi sa pagbutang sa Green channel ug Pula nga channel sa larawan AO ug PI fluorescence, dugang sa usa ka mahayag nga kapatagan.Ang mga pananglitan nga mga hulagway gipakita sa Figure 2.
Figure 2. Mga hulagway sa wala pa i-transport ug human sa transportasyon sa AdMSCs.A. Sa wala pa ang transportasyon;gipakita ang usa ka representante nga imahe.B. Human sa transportasyon;gipakita ang usa ka representante nga imahe.
Ang viability sa AdMSCs nabag-o pag-ayo pagkahuman sa transportasyon kung itandi sa wala pa ang transportasyon.Ang viability sa wala pa ang transportasyon mao ang 92%, apan kini mikunhod ngadto sa 71% human sa transportasyon.Ang resulta gipakita sa Figure 3.
Figure 3. Ang viability nga mga resulta sa AdMSCs (Sa wala pa ang transportasyon ug pagkahuman sa transportasyon)
Ang diametro ug aggregation gitino usab ni Countstar Rigel.Ang diametro sa mga AdMSC nausab pag-ayo human sa transportasyon kung itandi sa wala pa ang transportasyon.Ang diametro sa wala pa ang transportasyon mao ang 19µm, apan kini misaka sa 21µm pagkahuman sa transportasyon.Ang aggregation sa sa wala pa ang transportasyon mao ang 20%, apan kini misaka ngadto sa 25% human sa transportasyon.Gikan sa mga hulagway nga nakuha ni Countstar Rigel, ang phenotype sa AdMSCs nausab pag-ayo human sa transportasyon.Ang mga resulta gipakita sa Figure 4.
Figure 4: Ang diametro ug mga resulta sa aggregation.A: Ang mga representante nga mga hulagway sa AdMSCs, ang phenotype sa AdMSCs nausab pag-ayo human sa transportasyon.B: Ang aggregation sa wala pa ang transportasyon mao ang 20%, apan kini misaka ngadto sa 25% human sa transportasyon.C: Ang diametro sa wala pa ang pagdala kay 19µm, apan kini misaka ngadto sa 21µm human sa transportasyon.
Tinoa ang immunophenotype sa AdMSCs ni Countstar Rigel
Ang immunophenotype sa AdMSCs gitino sa Countstar Rigel, ang AdMSCs gilumlom sa lainlaing antibody matag usa (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Usa ka pamaagi sa aplikasyon nga kolor sa signal ang gihimo pinaagi sa pag-set sa usa ka Green nga channel sa imahe sa PE fluorescence, dugang usa ka hayag nga uma.Ang hayag nga field picture reference segmentation gigamit isip maskara sa pag-sample sa PE fluorescence signal.Ang mga resulta sa CD105 gipakita (Figure 5).
Figure 5: Ang mga resulta sa CD105 sa AdMSCs gitino ni Countstar Rigel.A: Quantitative analysis sa positibo nga porsyento sa CD105 sa lain-laing mga sample sa FCS express 5 plus software.B: Ang taas nga kalidad nga mga imahe naghatag dugang nga morphological nga impormasyon.C: Gi-validate nga mga resulta pinaagi sa mga thumbnail sa matag usa ka cell, ang mga gamit sa software sa FCS nagbahin sa mga cell ngadto sa lain-laing mga grupo sumala sa ilang lain-laing protina nga ekspresyon.
Ang ubang mga resulta sa antibodies gipakita sa Fig 6
Hulagway 6: A: Usa ka representante nga hulagway sa mga ASC nga adunay tipikal nga pormag spindle nga morpolohiya.Gikuha sa OLYMPUS mikroskopyo.Orihinal nga pagpadako, (10x).B: Ang adipogenic nga pagkalahi sa mga ASC gipamatud-an sa Ruthenium Red staining nga nagpakita sa mga lugar sa mineralization.Gikuha sa OLYMPUS mikroskopyo.Orihinal nga pagpadako (10x).C: Countstar FL nga kinaiya sa mga ASC.
Summary:
Ang Countstar FL mahimong magmonitor sa konsentrasyon, viability, ug phenotype nga mga kinaiya (ug ang ilang mga pagbag-o) sa panahon sa paghimo ug pagkalainlain niini nga mga stem cell.Ang FCS express naghatag sa function sa pagrepaso sa matag signal cell, pag-validate sa datos pinaagi sa imahe.Ang tiggamit mahimo usab nga adunay pagsalig sa paghimo sa sunod nga mga eksperimento base sa mga resulta sa Countstar Rigel.Ang Countstar Rigel nagtanyag usa ka paspas, sopistikado, ug kasaligan nga pamaagi alang sa pagkontrol sa kalidad sa mga stem cell.
