Resumo: Mezenkimaj stamĉeloj estas subaro de pluripotentaj stamĉeloj kiuj povas esti izolitaj de la mezodermo.Kun siaj mem-reproduktaj renovigo kaj plurdirektaj diferencigaj trajtoj, ili posedas altan potencialon por diversaj terapioj en medicino.Mezenkimaj stamĉeloj havas unikan imunfenotipon kaj imunreguligan kapablon.Tial mezenkimaj stamĉeloj jam estas vaste uzitaj en stamĉeltransplantadoj, histoinĝenieristiko, kaj organtransplantado.Kaj Preter ĉi tiuj aplikoj, ili estas uzataj kiel ideala ilo en histo-inĝenierado kiel semaj ĉeloj en serio de bazaj kaj klinikaj esploraj eksperimentoj.Ĝis nun, ne ekzistas vaste akceptita metodo kaj normo por la kvalitkontrolo de mezenkimaj stamĉeloj.La Countstar Rigel povas monitori la koncentriĝon, daŭrigeblecon, kaj fenotipkarakterizaĵojn (kaj iliajn ŝanĝojn) dum la produktado kaj diferencigo de tiuj stamĉeloj.La Countstar Rigel ankaŭ havas la avantaĝon akiri pliajn morfologiajn informojn, disponigitajn per la permanentaj helaj kampoj kaj fluoreskec-bazitaj bildregistradoj dum la tuta procezo de ĉelkvalita monitorado.La Countstar Rigel ofertas rapidan, altnivelan kaj fidindan metodon por la kvalita kontrolo de stamĉeloj.
Materialoj kaj metodoj:
Adipose-derivitaj mezenkimaj stamĉeloj (AdMSCs) estis donacitaj de profesoro Nianmin Qi, AO/PI-makula solvo (Shanghai RuiYu, CF002).Antikorpo: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCoj estis kultivitaj en 37℃, 5% CO2 humidigita inkubatoro.Digestu kun tripsino antaŭ uzo.
KD-signo-makula proceduro estis sekvita kiel la manlibro de antikorpo.
KD-markdetekto kun Countstar Rigel:
1. Signal-kolora aplika proceduro estis kreita per agordo de la PE-kanalo al bilda PE-fluoresko.
2. 3 kampoj estis kaptitaj de ĉiu ĉambro.
3. Post kiam bildigo kaj komenca analizo estis kompletaj, la sojlo (logpordego) agordo por pozitiva kaj negativa transfekto estis fiksita per FCS-programaro.
Kvalita kontrolo de stamĉelo
La sekva Figuro (Figuro 1) montras la proceduron de stamĉela terapio .
Figuro 1: La proceduro por stamĉela terapio
Rezulto:
Determinante la koncentriĝon, daŭrigeblecon, diametron kaj agregadon de AdMSCoj.
La daŭrigebleco de AdMSCs estis determinita de AO/PI, Du-kolora aplika proceduro estis kreita fiksante Verdan kanalon kaj Ruĝan kanalon por bildi AO kaj PI-fluoreskon, plus helan kampon.Ekzemplaj bildoj estis montritaj en Figuro 2.
Figuro 2. Bildoj de antaŭ transporto kaj post transportado de AdMSCs.A. Antaŭ transporto;reprezenta bildo estas montrita.B. Post transportado;reprezenta bildo estas montrita.
La daŭrigebleco de AdMSCs estis ŝanĝita draste post transportado kompare kun antaŭ transporto.La daŭrigebleco antaŭ transporto estis 92%, sed ĝi reduktis al 71% post transportado.La rezulto estis montrita en Figuro 3.
Figuro 3. La daŭrigeblaj rezultoj de AdMSCs (Antaŭ transporto kaj post transportado)
La diametro kaj agregado ankaŭ estis determinitaj fare de Countstar Rigel.La diametro de AdMSCs estis draste ŝanĝita post transportado kompare kun antaŭ transporto.La diametro antaŭ transporto estis 19µm, sed ĝi pliiĝis al 21µm post transportado.La agregado de antaŭ transporto estis 20%, sed ĝi pliiĝis al 25% post transportado.De la bildoj kaptitaj de Countstar Rigel, la fenotipo de AdMSCs estis draste ŝanĝita post transportado.La rezultoj estis montritaj en Figuro 4.
Figuro 4: La diametro kaj agregado rezultoj.R: La reprezentaj bildoj de AdMSC-oj, la fenotipo de AdMSC-oj estis draste ŝanĝitaj post transportado.B: La agregado antaŭ transporto estis 20%, sed ĝi pliiĝis al 25% post transportado.C: La diametro antaŭ transporto estis 19µm, sed ĝi pliiĝis al 21µm post transportado.
Determini la imunofenotipon de AdMSCs de Countstar Rigel
La imunofenotipo de AdMSCs estis determinita de Countstar Rigel, AdMSCs estis kovataj kun malsama antikorpo respektive (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Signal-kolora aplika proceduro estis kreita fiksante Verdan kanalon por bildi PE-fluoreskon, kaj plie helan kampon.Brila kampa bilda referenca segmentigo estis aplikita kiel masko por provi la PE-fluoreskecan signalon.La rezultoj de CD105 estis montritaj (Figuro 5).
Figuro 5: CD105-rezultoj de AdMSCs estis determinitaj de Countstar Rigel.A: Kvanta analizo de la pozitiva procento de CD105 en malsamaj specimenoj per FCS express 5 plus programaro.B: Altkvalitaj bildoj provizas pliajn morfologiajn informojn.C: Konfirmitaj rezultoj per bildetoj de ĉiu unuopa ĉelo, la FCS-programaraj iloj dividis la ĉelojn en malsamajn grupojn laŭ ilia diversa proteina esprimo.
Aliaj antikorpaj rezultoj estis montritaj en Fig 6
Figuro 6: A: reprezenta bildo de ASCoj kun tipa spindforma morfologio.Kaptita de OLYMPUS-mikroskopo.Originala pligrandigo, (10x).B: Adipogena diferencigo de ASCoj estas konstatita per Ruthenium Red-makulado montranta areojn de mineraligo.Kaptita de OLYMPUS-mikroskopo.Originala pligrandigo (10x).C: Countstar FL-karakterizado de ASCoj.
Resumo:
La Countstar FL povas monitori la koncentriĝon, daŭrigeblecon, kaj fenotipkarakterizaĵojn (kaj iliajn ŝanĝojn) dum la produktado kaj diferencigo de tiuj stamĉeloj.FCS express provizas la funkcion por revizii ĉiun signalĉelon, validigi la datumojn per la bildo.La uzanto ankaŭ povas havi la konfidon por efektivigi la sekvajn eksperimentojn bazitajn sur la rezultoj de Countstar Rigel.La Countstar Rigel ofertas rapidan, altnivelan kaj fidindan metodon por la kvalita kontrolo de stamĉeloj.
