Abstract: Mesenchymal qia hlwb yog ib feem ntawm pluripotent qia hlwb uas tuaj yeem raug cais tawm ntawm mesoderm.Nrog rau lawv tus kheej-replication rov ua dua tshiab thiab ntau txoj kev sib txawv ntawm cov yam ntxwv, lawv muaj peev xwm rau ntau yam kev kho mob hauv cov tshuaj.Mesenchymal qia hlwb muaj qhov tshwj xeeb tiv thaiv kab mob phenotype thiab kev tiv thaiv kab mob muaj peev xwm.Yog li ntawd, mesenchymal qia hlwb twb tau siv dav hauv kev hloov pauv ntawm cov qia, cov ntaub so ntswg engineering, thiab kev hloov pauv hauv nruab nrog cev.Thiab dhau ntawm cov ntawv thov no, lawv tau siv los ua cov cuab yeej zoo tshaj plaws hauv kev tsim cov ntaub so ntswg ua cov noob qoob loo hauv cov kev tshawb fawb hauv kev sim thiab kev sim tshuaj.Txog rau tam sim no, tsis muaj txoj kev lees paub dav dav thiab tus qauv rau kev tswj hwm zoo ntawm mesenchymal qia hlwb.Lub Countstar Rigel tuaj yeem saib xyuas cov concentration, kev muaj peev xwm, thiab cov yam ntxwv phenotype (thiab lawv cov kev hloov pauv) thaum lub sijhawm tsim khoom thiab sib txawv ntawm cov qia hlwb.Lub Countstar Rigel kuj tseem muaj qhov zoo dua hauv kev tau txais cov ntaub ntawv morphological ntxiv, muab los ntawm cov duab ci ntsa iab thiab fluorescence-raws li cov duab kaw thaum tag nrho cov txheej txheem ntawm kev saib xyuas ntawm tes.Countstar Rigel muaj cov txheej txheem ceev, sophisticated, thiab txhim khu kev qha rau kev tswj cov qia hlwb.
Cov ntaub ntawv thiab txoj kev:
Adipose-derived mesenchymal qia hlwb (AdMSCs) tau muab khoom plig los ntawm xibfwb Nianmin Qi, AO/PI staining tov (Shanghai RuiYu, CF002).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs tau coj mus kuaj hauv 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Digest nrog trypsin ua ntej siv.
CD marker staining txheej txheem tau ua raws li phau ntawv ntawm cov tshuaj tiv thaiv.
CD marker detection nrog Countstar Rigel:
1. Cov txheej txheem kev teeb tsa-xim xim tau tsim los ntawm kev teeb tsa PE channel rau duab PE fluorescence.
2. 3 lub teb raug ntes los ntawm txhua chav.
3. Tom qab kev tshuaj xyuas thiab kev tshuaj xyuas thawj zaug tiav lawm, qhov chaw pib (log rooj vag) teeb tsa rau qhov zoo thiab qhov tsis zoo yog tsim los ntawm FCS software.
Kev tswj kom zoo ntawm qia cell
Cov duab hauv qab no (Daim duab 1) qhia txog cov txheej txheem ntawm stem cell kho .
Daim duab 1: Cov txheej txheem rau kev kho cov qia cell
Cov txiaj ntsig:
Txiav txim siab qhov concentration, kev muaj peev xwm, txoj kab uas hla, thiab kev sib sau ntawm AdMSCs.
Qhov kev muaj peev xwm ntawm AdMSCs tau txiav txim siab los ntawm AO / PI, Cov txheej txheem kev thov ob xim yog tsim los ntawm kev teeb tsa Green channel thiab Red channel rau cov duab AO thiab PI fluorescence, ntxiv rau qhov kaj.Cov duab piv txwv tau pom hauv daim duab 2.
Daim duab 2. Cov duab ua ntej kev thauj mus los thiab tom qab kev thauj mus los ntawm AdMSCs.A. Ua ntej thauj;muaj ib daim duab sawv cev.B. Tom qab kev thauj mus los;muaj ib daim duab sawv cev.
Qhov kev muaj peev xwm ntawm AdMSCs tau hloov pauv loj heev tom qab kev thauj mus los thaum piv nrog ua ntej kev thauj mus los.Lub peev xwm ua ntej kev thauj mus los yog 92%, tab sis nws txo qis rau 71% tom qab kev thauj mus los.Cov txiaj ntsig tau pom hauv daim duab 3.
Daim duab 3. Cov txiaj ntsig muaj txiaj ntsig ntawm AdMSCs (Ua ntej thauj thiab tom qab kev thauj mus los)
Txoj kab uas hla thiab kev sib sau ua ke kuj tau txiav txim los ntawm Countstar Rigel.Txoj kab uas hla ntawm AdMSCs tau hloov pauv loj heev tom qab kev thauj mus los thaum piv nrog ua ntej kev thauj mus los.Txoj kab uas hla ua ntej kev thauj mus los yog 19µm, tab sis nws tau nce mus rau 21µm tom qab kev thauj mus los.Kev sib sau ua ntej kev thauj mus los yog 20%, tab sis nws tau nce mus rau 25% tom qab kev thauj mus los.Los ntawm cov duab ntes los ntawm Countstar Rigel, phenotype ntawm AdMSCs tau hloov pauv sai heev tom qab kev thauj mus los.Cov txiaj ntsig tau pom hauv daim duab 4.
Daim duab 4: Txoj kab uas hla thiab kev sib sau ua ke.A: Cov duab sawv cev ntawm AdMSCs, phenotype ntawm AdMSCs tau hloov pauv sai heev tom qab kev thauj mus los.B: Kev sib sau ua ntej kev thauj mus los yog 20%, tab sis nws tau nce mus rau 25% tom qab kev thauj mus los.C: Txoj kab uas hla ua ntej kev thauj mus los yog 19µm, tab sis nws tau nce mus rau 21µm tom qab kev thauj mus los.
Txiav txim siab qhov immunophenotype ntawm AdMSCs los ntawm Countstar Rigel
Lub immunophenotype ntawm AdMSCs tau txiav txim los ntawm Countstar Rigel, AdMSCs tau incubated nrog txawv antibody raws li (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Cov txheej txheem kev teeb tsa-xim xim tau tsim los ntawm kev teeb tsa Green channel rau duab PE fluorescence, ntxiv rau thaj chaw kaj.Cov duab ci ntsa iab siv segmentation tau siv los ua daim npog ntsej muag rau cov qauv PE fluorescence teeb liab.Cov txiaj ntsig ntawm CD105 tau pom (Daim duab 5).
Daim duab 5: CD105 cov txiaj ntsig ntawm AdMSCs tau txiav txim los ntawm Countstar Rigel.A: Kev soj ntsuam ntau ntawm qhov feem pua ntawm CD105 hauv cov qauv sib txawv los ntawm FCS nthuav qhia 5 ntxiv rau software.B: Cov duab zoo siab muab cov ntaub ntawv morphological ntxiv.C: Cov txiaj ntsig tau lees paub los ntawm cov duab me me ntawm txhua lub xov tooj ntawm tes, FCS software cov cuab yeej faib cov hlwb rau ntau pawg raws li lawv qhov sib txawv ntawm cov protein.
Lwm cov tshuaj tiv thaiv tau pom hauv daim duab 6
Daim duab 6: A: Ib daim duab sawv cev ntawm ASCs nrog cov spindle-shaped morphology.Captured los ntawm OLYMPUS microscope.Thawj magnification, (10x).B: Adipogenic sib txawv ntawm ASCs yog pov thawj los ntawm Ruthenium Liab staining qhia thaj chaw ntawm mineralization.Captured los ntawm OLYMPUS microscope.Thawj magnification (10x).C: Countstar FL tus yam ntxwv ntawm ASCs.
Cov ntsiab lus:
Lub Countstar FL tuaj yeem saib xyuas qhov concentration, kev muaj peev xwm, thiab cov yam ntxwv phenotype (thiab lawv cov kev hloov pauv) thaum lub sijhawm tsim khoom thiab sib txawv ntawm cov qia hlwb.FCS nthuav qhia cov khoom siv los tshuaj xyuas txhua lub xov tooj ntawm tes, txheeb xyuas cov ntaub ntawv los ntawm daim duab.Tus neeg siv kuj tuaj yeem muaj kev ntseeg siab los ua qhov kev sim tom ntej raws li Countstar Rigel cov txiaj ntsig.Countstar Rigel muaj cov txheej txheem ceev, sophisticated, thiab txhim khu kev qha rau kev tswj cov qia hlwb.
