Abstract: Ang mesenchymal stem cell ay isang subset ng pluripotent stem cells na maaaring ihiwalay sa mesoderm.Sa kanilang pag-renew ng self-replication at mga katangian ng pagkakaiba-iba ng maraming direksyon, nagtataglay sila ng mataas na potensyal para sa iba't ibang mga therapies sa medisina.Ang mga mesenchymal stem cell ay may natatanging immune phenotype at kakayahan sa regulasyon ng immune.Samakatuwid, ang mga mesenchymal stem cell ay malawakang ginagamit sa mga stem cell transplantation, tissue engineering, at organ transplantation.At Higit pa sa mga application na ito, ginagamit ang mga ito bilang isang mainam na tool sa tissue engineering bilang seeder cells sa isang serye ng mga basic at clinical research experiment.Hanggang ngayon, walang malawak na tinatanggap na paraan at pamantayan para sa kontrol sa kalidad ng mga mesenchymal stem cell.Maaaring subaybayan ng Countstar Rigel ang konsentrasyon, posibilidad na mabuhay, at mga katangian ng phenotype (at ang kanilang mga pagbabago) sa panahon ng paggawa at pagkakaiba-iba ng mga stem cell na ito.Ang Countstar Rigel ay mayroon ding kalamangan sa pagkuha ng karagdagang morphological na impormasyon, na ibinigay ng permanenteng brightfield at fluorescence-based na mga pag-record ng imahe sa buong proseso ng pagsubaybay sa kalidad ng cell.Ang Countstar Rigel ay nag-aalok ng mabilis, sopistikado, at maaasahang paraan para sa kontrol ng kalidad ng mga stem cell.
Mga materyales at pamamaraan:
Ang adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSCs) ay niregalo ni Propesor Nianmin Qi, AO/PI staining solution (Shanghai RuiYu, CF002).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Ang mga AdMSC ay na-culture sa isang 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Digest na may trypsin bago gamitin.
Ang pamamaraan ng paglamlam ng CD marker ay sinundan bilang manual ng antibody.
CD marker detection gamit ang Countstar Rigel:
1. Isang pamamaraan ng aplikasyon ng signal-color ay ginawa sa pamamagitan ng pagtatakda ng PE channel sa imahe ng PE fluorescence.
2. 3 mga patlang ang nakuha mula sa bawat silid.
3. Pagkatapos makumpleto ang imaging at paunang pagsusuri, ang setting ng threshold (log gate) para sa positibo at negatibong paglipat ay itinakda ng software ng FCS.
Kontrol ng kalidad ng stem cell
Ang sumusunod na Figure (Figure 1) ay nagpapakita ng pamamaraan ng stem cell therapy .
Figure 1: Ang pamamaraan para sa stem cell therapy
Mga resulta:
Pagtukoy sa konsentrasyon, viability, diameter, at pagsasama-sama ng mga AdMSC.
Ang posibilidad na mabuhay ng mga AdMSC ay natukoy ng AO/PI, Isang pamamaraan ng aplikasyon na may dalawahang kulay ang ginawa sa pamamagitan ng pagtatakda ng Green channel at Red channel sa imaheng AO at PI fluorescence, kasama ang maliwanag na field.Ang mga halimbawang larawan ay ipinakita sa Figure 2.
Figure 2. Mga larawan ng bago ang transportasyon at pagkatapos ng transportasyon ng mga AdMSC.A. Bago ang transportasyon;ipinapakita ang isang imaheng kinatawan.B. Pagkatapos ng transportasyon;ipinapakita ang isang imaheng kinatawan.
Ang kakayahang umangkop ng mga AdMSC ay nabago nang husto pagkatapos ng transportasyon kung ihahambing sa bago ang transportasyon.Ang viability bago ang transportasyon ay 92%, ngunit ito ay nabawasan sa 71% pagkatapos ng transportasyon.Ang resulta ay ipinakita sa Figure 3.
Figure 3. Ang mga resulta ng viability ng AdMSCs (Bago ang transportasyon at pagkatapos ng transportasyon)
Ang diameter at pagsasama-sama ay natukoy din ng Countstar Rigel.Ang diameter ng mga AdMSC ay binago nang husto pagkatapos ng transportasyon kung ihahambing sa bago ang transportasyon.Ang diameter bago ang transportasyon ay 19µm, ngunit tumaas ito sa 21µm pagkatapos ng transportasyon.Ang pagsasama-sama ng bago ang transportasyon ay 20%, ngunit ito ay tumaas sa 25% pagkatapos ng transportasyon.Mula sa mga larawang nakunan ni Countstar Rigel, ang phenotype ng mga AdMSC ay binago nang husto pagkatapos ng transportasyon.Ang mga resulta ay ipinakita sa Figure 4.
Figure 4: Ang diameter at mga resulta ng pagsasama-sama.A: Ang mga larawang kinatawan ng AdMSC, ang phenotype ng AdMSC ay binago nang husto pagkatapos ng transportasyon.B: Ang pagsasama-sama bago ang transportasyon ay 20%, ngunit ito ay tumaas sa 25% pagkatapos ng transportasyon.C: Ang diameter bago ang transportasyon ay 19µm, ngunit tumaas ito sa 21µm pagkatapos ng transportasyon.
Tukuyin ang immunophenotype ng AdMSC ni Countstar Rigel
Ang immunophenotype ng AdMSC ay tinutukoy ng Countstar Rigel, ang mga AdMSC ay natupok ng magkakaibang antibody ayon sa pagkakabanggit (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Ang isang pamamaraan ng application na may kulay ng signal ay ginawa sa pamamagitan ng pagtatakda ng isang Green channel sa imahe ng PE fluorescence, kasama ang isang maliwanag na field.Ang maliwanag na field picture reference segmentation ay inilapat bilang isang mask upang ma-sample ang PE fluorescence signal.Ang mga resulta ng CD105 ay ipinakita (Larawan 5).
Figure 5: Ang mga resulta ng CD105 ng AdMSC ay natukoy ng Countstar Rigel.A: Quantitative analysis ng positibong porsyento ng CD105 sa iba't ibang sample ng FCS express 5 plus software.B: Ang mga de-kalidad na larawan ay nagbibigay ng karagdagang morphological na impormasyon.C: Na-validate ang mga resulta sa pamamagitan ng mga thumbnail ng bawat solong cell, hinati ng mga tool ng software ng FCS ang mga cell sa iba't ibang grupo ayon sa kanilang iba't ibang expression ng protina.
Ang iba pang mga resulta ng antibodies ay ipinakita sa Fig 6
Figure 6: A: Isang kinatawan na imahe ng mga ASC na may tipikal na hugis spindle na morpolohiya.Nakunan ng OLYMPUS microscope.Orihinal na magnification, (10x).B: Ang adipogenic na pagkita ng kaibhan ng mga ASC ay napatunayan ng paglamlam ng Ruthenium Red na nagpapakita ng mga lugar ng mineralization.Nakunan ng OLYMPUS microscope.Orihinal na magnification (10x).C: Countstar FL characterization ng mga ASC.
Buod:
Maaaring subaybayan ng Countstar FL ang konsentrasyon, posibilidad na mabuhay, at mga katangian ng phenotype (at ang kanilang mga pagbabago) sa panahon ng paggawa at pagkakaiba-iba ng mga stem cell na ito.Nagbibigay ang FCS express ng function upang suriin ang bawat signal cell, patunayan ang data sa pamamagitan ng imahe.Maaari ding magkaroon ng kumpiyansa ang user na isagawa ang mga susunod na eksperimento batay sa mga resulta ng Countstar Rigel.Ang Countstar Rigel ay nag-aalok ng mabilis, sopistikado, at maaasahang paraan para sa kontrol ng kalidad ng mga stem cell.
