Trừu tượng: Tế bào gốc trung mô là một tập hợp con của các tế bào gốc đa năng có thể được phân lập từ trung bì.Với đặc điểm đổi mới tự tái tạo và phân biệt đa hướng, chúng có tiềm năng cao cho các liệu pháp điều trị khác nhau trong y học.Tế bào gốc trung mô có kiểu hình miễn dịch độc đáo và khả năng điều hòa miễn dịch.Do đó, tế bào gốc trung mô đã được sử dụng rộng rãi trong cấy ghép tế bào gốc, kỹ thuật mô và cấy ghép nội tạng.Ngoài những ứng dụng này, chúng còn được sử dụng như một công cụ lý tưởng trong kỹ thuật mô làm tế bào hạt giống trong một loạt các thí nghiệm nghiên cứu cơ bản và lâm sàng.Cho đến nay, vẫn chưa có một phương pháp và tiêu chuẩn được chấp nhận rộng rãi để kiểm tra chất lượng tế bào gốc trung mô.Countstar Rigel có thể theo dõi nồng độ, khả năng sống và các đặc điểm kiểu hình (và những thay đổi của chúng) trong quá trình sản xuất và biệt hóa các tế bào gốc này.Countstar Rigel cũng có lợi thế trong việc thu thập thông tin hình thái bổ sung, được cung cấp bởi trường sáng vĩnh viễn và các bản ghi hình ảnh dựa trên huỳnh quang trong toàn bộ quá trình theo dõi chất lượng tế bào.Countstar Rigel cung cấp một phương pháp nhanh chóng, tinh vi và đáng tin cậy để kiểm soát chất lượng tế bào gốc.
Nguyên liệu và phương pháp:
Tế bào gốc trung mô có nguồn gốc từ mỡ (AdMSCs) được trao tặng bởi Giáo sư Nianmin Qi, giải pháp nhuộm AO / PI (Shanghai RuiYu, CF002).Kháng thể: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (Công ty BD).
AdMSCs được nuôi trong tủ ấm 37 ℃, 5% CO2.Tiêu hóa bằng trypsin trước khi sử dụng.
Quy trình nhuộm đánh dấu CD được tuân theo như hướng dẫn sử dụng kháng thể.
Phát hiện điểm đánh dấu CD với Countstar Rigel:
1. Một quy trình ứng dụng màu tín hiệu được tạo ra bằng cách đặt kênh PE thành huỳnh quang PE hình ảnh.
2. 3 trường được chụp từ mỗi buồng.
3. Sau khi hình ảnh và phân tích ban đầu hoàn tất, cài đặt ngưỡng (cổng nhật ký) cho quá trình truyền âm tính và tích cực đã được thiết lập bởi phần mềm FCS.
Kiểm tra chất lượng tế bào gốc
Hình sau (Hình 1) cho thấy quy trình của liệu pháp tế bào gốc .
Hình 1: Quy trình điều trị tế bào gốc
Kết quả:
Xác định nồng độ, khả năng tồn tại, đường kính và tập hợp của AdMSC.
Khả năng tồn tại của AdMSCs được xác định bởi AO / PI, Một quy trình ứng dụng hai màu được tạo ra bằng cách đặt kênh Xanh lục và kênh Đỏ thành hình ảnh huỳnh quang AO và PI, cộng với trường sáng.Hình ảnh ví dụ được hiển thị trong Hình 2.
Hình 2. Hình ảnh của AdMSC trước khi vận chuyển và sau khi vận chuyển.A. Trước khi vận chuyển;một hình ảnh đại diện được hiển thị.B. Sau khi vận chuyển;một hình ảnh đại diện được hiển thị.
Khả năng tồn tại của AdMSCs đã thay đổi đáng kể sau khi vận chuyển so với trước khi vận chuyển.Khả năng tồn tại trước khi vận chuyển là 92%, nhưng nó giảm xuống còn 71% sau khi vận chuyển.Kết quả được thể hiện trong Hình 3.
Hình 3. Kết quả khả năng tồn tại của AdMSCs (Trước khi vận chuyển và sau khi vận chuyển)
Đường kính và tập hợp cũng được xác định bởi Countstar Rigel.Đường kính của AdMSCs đã thay đổi đáng kể sau khi vận chuyển so với trước khi vận chuyển.Đường kính trước khi vận chuyển là 19µm, nhưng nó đã tăng lên 21µm sau khi vận chuyển.Tổng giá trị trước khi vận chuyển là 20%, nhưng sau khi vận chuyển đã tăng lên 25%.Từ những hình ảnh được chụp bởi Countstar Rigel, kiểu hình của AdMSCs đã thay đổi đáng kể sau khi vận chuyển.Kết quả được thể hiện trong Hình 4.
Hình 4: Đường kính và kết quả tổng hợp.A: Hình ảnh đại diện của AdMSCs, kiểu hình của AdMSCs đã bị thay đổi đáng kể sau khi vận chuyển.B: Tổng hợp trước khi vận chuyển là 20%, nhưng nó đã tăng lên 25% sau khi vận chuyển.C: Đường kính trước khi vận chuyển là 19µm, nhưng nó đã tăng lên 21µm sau khi vận chuyển.
Xác định kiểu miễn dịch của AdMSCs bằng Countstar Rigel
Kiểu miễn dịch của AdMSCs được xác định bởi Countstar Rigel, AdMSCs được ủ với các kháng thể khác nhau tương ứng (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Một quy trình ứng dụng màu tín hiệu được tạo ra bằng cách đặt kênh Xanh lục cho hình ảnh huỳnh quang PE, cộng với trường sáng.Phân đoạn tham chiếu hình ảnh trường sáng được áp dụng như một mặt nạ để lấy mẫu tín hiệu huỳnh quang PE.Kết quả của CD105 đã được hiển thị (Hình 5).
Hình 5: Kết quả CD105 của AdMSCs được xác định bởi Countstar Rigel.A: Phân tích định lượng tỷ lệ phần trăm dương tính của CD105 trong các mẫu khác nhau bằng phần mềm FCS express 5 plus.B: Hình ảnh chất lượng cao cung cấp thêm thông tin hình thái học.C: Kết quả được xác thực bằng hình thu nhỏ của mỗi ô, công cụ phần mềm FCS chia các ô thành các nhóm khác nhau tùy theo biểu hiện protein khác nhau của chúng.
Các kết quả kháng thể khác được trình bày trong Hình 6
Hình 6: A: Hình ảnh đại diện của ASC với hình thái hình trục chính điển hình.Chụp bằng kính hiển vi OLYMPUS.Độ phóng đại ban đầu, (10x).B: Sự phân biệt adipogenic của ASC được chứng minh bằng nhuộm Ruthenium Red cho thấy các khu vực khoáng hóa.Chụp bằng kính hiển vi OLYMPUS.Độ phóng đại ban đầu (10x).C: Đặc tính Countstar FL của ASC.
Bản tóm tắt:
Countstar FL có thể theo dõi nồng độ, khả năng tồn tại và các đặc điểm kiểu hình (và những thay đổi của chúng) trong quá trình sản xuất và biệt hóa các tế bào gốc này.FCS express cung cấp chức năng xem xét mọi ô tín hiệu, xác thực dữ liệu thông qua hình ảnh.Người dùng cũng có thể tự tin để thực hiện các thử nghiệm tiếp theo dựa trên kết quả của Countstar Rigel.Countstar Rigel cung cấp một phương pháp nhanh chóng, tinh vi và đáng tin cậy để kiểm soát chất lượng tế bào gốc.
