नॉव्हेल इमेजिंग सायटोमेट वापरून स्टेम सेलची थेट एकाग्रता, व्यवहार्यता आणि फीनोटाइप मापन

गोषवारा: मेसेन्कायमल स्टेम पेशी हे प्लुरिपोटेंट स्टेम पेशींचे एक उपसंच आहेत जे मेसोडर्मपासून वेगळे केले जाऊ शकतात.त्यांच्या स्व-प्रतिकृतीचे नूतनीकरण आणि बहु-दिशा भिन्नता वैशिष्ट्यांसह, त्यांच्याकडे वैद्यकातील विविध उपचारांसाठी उच्च क्षमता आहे.मेसेन्कायमल स्टेम पेशींमध्ये एक अद्वितीय रोगप्रतिकारक फीनोटाइप आणि रोगप्रतिकारक नियमन क्षमता असते.म्हणून, मेसेन्कायमल स्टेम पेशींचा स्टेम सेल प्रत्यारोपण, ऊतक अभियांत्रिकी आणि अवयव प्रत्यारोपणामध्ये मोठ्या प्रमाणावर वापर केला जातो.आणि या ऍप्लिकेशन्सच्या पलीकडे, ते टिश्यू अभियांत्रिकीमध्ये एक आदर्श साधन म्हणून सीडर पेशी म्हणून मूलभूत आणि क्लिनिकल संशोधन प्रयोगांच्या मालिकेत वापरले जातात.आत्तापर्यंत, मेसेन्कायमल स्टेम पेशींच्या गुणवत्ता नियंत्रणासाठी व्यापकपणे स्वीकारलेली पद्धत आणि मानक नाही.काउंटस्टार रीगेल या स्टेम पेशींच्या निर्मिती आणि भिन्नता दरम्यान एकाग्रता, व्यवहार्यता आणि फेनोटाइप वैशिष्ट्यांचे (आणि त्यांचे बदल) निरीक्षण करू शकते.काउंटस्टार रीगेलला सेल गुणवत्ता निरीक्षणाच्या संपूर्ण प्रक्रियेदरम्यान कायमस्वरूपी ब्राइटफील्ड आणि फ्लूरोसेन्स-आधारित प्रतिमा रेकॉर्डिंगद्वारे प्रदान केलेली अतिरिक्त रूपात्मक माहिती मिळविण्याचा फायदा आहे.काउंटस्टार रिगेल स्टेम पेशींच्या गुणवत्ता नियंत्रणासाठी जलद, अत्याधुनिक आणि विश्वासार्ह पद्धत देते.

साहित्य आणि पद्धती:
प्रोफेसर निआनमिन क्यूई, एओ/पीआय स्टेनिंग सोल्यूशन (शांघाय रुईयू, सीएफ००२) यांनी अॅडिपोज-व्युत्पन्न मेसेन्कायमल स्टेम सेल्स (AdMSCs) भेट दिले होते.प्रतिपिंड: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD कंपनी).
AdMSC 37℃, 5% CO2 आर्द्रीकृत इनक्यूबेटरमध्ये संवर्धन केले गेले.वापरण्यापूर्वी ट्रिप्सिनसह डायजेस्ट करा.
अँटीबॉडीच्या मॅन्युअल प्रमाणे सीडी मार्कर स्टेनिंग प्रक्रिया पाळली गेली.
Countstar Rigel सह सीडी मार्कर शोधणे:
1. PE चॅनेलला प्रतिमा PE फ्लोरोसेन्सवर सेट करून सिग्नल-रंग अनुप्रयोग प्रक्रिया तयार केली गेली.
2. प्रत्येक चेंबरमधून 3 फील्ड ताब्यात घेण्यात आले.
3. इमेजिंग आणि प्रारंभिक विश्लेषण पूर्ण झाल्यानंतर, FCS सॉफ्टवेअरद्वारे सकारात्मक आणि नकारात्मक अभिसरणासाठी थ्रेशोल्ड (लॉग गेट) सेटिंग सेट केली गेली.

स्टेम सेलची गुणवत्ता नियंत्रण
खालील आकृती (आकृती 1) ची कार्यपद्धती दर्शवते स्टेम सेल थेरपी .

आकृती 1: स्टेम सेल थेरपीची प्रक्रिया

परिणाम:
AdMSCs ची एकाग्रता, व्यवहार्यता, व्यास आणि एकत्रीकरण निश्चित करणे.
AdMSCs ची व्यवहार्यता AO/PI द्वारे निर्धारित केली गेली होती, AO आणि PI फ्लूरोसेन्स प्रतिमेसाठी ग्रीन चॅनल आणि रेड चॅनेल सेट करून, तसेच एक उज्ज्वल फील्ड सेट करून दुहेरी-रंग अनुप्रयोग प्रक्रिया तयार केली गेली.उदाहरण प्रतिमा आकृती 2 मध्ये दर्शविल्या होत्या.

आकृती 2. AdMSCs च्या वाहतुकीपूर्वीच्या आणि वाहतुकीनंतरच्या प्रतिमा.A. वाहतूक करण्यापूर्वी;एक प्रतिनिधी प्रतिमा दर्शविली आहे.B. वाहतूक केल्यानंतर;एक प्रतिनिधी प्रतिमा दर्शविली आहे.

वाहतुकीपूर्वीच्या तुलनेत AdMSCs ची व्यवहार्यता वाहतुकीनंतर मोठ्या प्रमाणात बदलली गेली.वाहतुकीपूर्वी व्यवहार्यता 92% होती, परंतु वाहतुकीनंतर ती 71% पर्यंत कमी झाली.परिणाम आकृती 3 मध्ये दर्शविला आहे.

आकृती 3. AdMSCs चे व्यवहार्यता परिणाम (वाहतुकीपूर्वी आणि वाहतुकीनंतर)

व्यास आणि एकत्रीकरण देखील काउंटस्टार रीगेलने निर्धारित केले होते.वाहतुकीपूर्वीच्या तुलनेत AdMSCs चा व्यास वाहतुकीनंतर मोठ्या प्रमाणात बदलला गेला.वाहतुकीपूर्वी व्यास 19µm होता, परंतु वाहतुकीनंतर तो 21µm पर्यंत वाढला.वाहतुकीपूर्वीचे एकत्रीकरण 20% होते, परंतु वाहतुकीनंतर ते 25% पर्यंत वाढले.काउंटस्टार रीगेलने कॅप्चर केलेल्या प्रतिमांमधून, वाहतुकीनंतर AdMSCs च्या फेनोटाइपमध्ये तीव्र बदल झाला.परिणाम आकृती 4 मध्ये दर्शविले आहेत.

आकृती 4: व्यास आणि एकत्रीकरण परिणाम.A: AdMSCs च्या प्रातिनिधिक प्रतिमा, AdMSCs च्या phenotype मध्ये वाहतुकीनंतर आमूलाग्र बदल झाला.ब: वाहतुकीपूर्वी एकत्रीकरण 20% होते, परंतु वाहतुकीनंतर ते 25% पर्यंत वाढले.C: वाहतुकीपूर्वी व्यास 19µm होता, परंतु वाहतुकीनंतर तो 21µm पर्यंत वाढला.

Countstar Rigel द्वारे AdMSCs चे इम्युनोफेनोटाइप निश्चित करा
AdMSCs चे इम्युनोफेनोटाइप काउंटस्टार रीगेल द्वारे निर्धारित केले गेले होते, AdMSCs अनुक्रमे वेगवेगळ्या प्रतिपिंडांसह उष्मायनित होते (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).ग्रीन चॅनेल इमेज पीई फ्लूरोसेन्स, तसेच चमकदार फील्ड सेट करून सिग्नल-रंग अनुप्रयोग प्रक्रिया तयार केली गेली.PE फ्लूरोसेन्स सिग्नलचा नमुना घेण्यासाठी ब्राइट फील्ड पिक्चर रेफरन्स सेगमेंटेशन मास्क म्हणून लागू केले गेले.CD105 चे परिणाम दर्शविले गेले (आकृती 5).

आकृती 5: AdMSCs चे CD105 परिणाम Countstar Rigel द्वारे निर्धारित केले गेले.A: FCS एक्सप्रेस 5 प्लस सॉफ्टवेअरद्वारे वेगवेगळ्या नमुन्यांमधील CD105 च्या सकारात्मक टक्केवारीचे परिमाणात्मक विश्लेषण.ब: उच्च-गुणवत्तेच्या प्रतिमा अतिरिक्त रूपात्मक माहिती पुरवतात.C: प्रत्येक सेलच्या लघुप्रतिमांद्वारे प्रमाणित परिणाम, FCS सॉफ्टवेअर टूल्सने पेशींना त्यांच्या भिन्न प्रोटीन अभिव्यक्तीनुसार वेगवेगळ्या गटांमध्ये विभागले.

इतर अँटीबॉडीज परिणाम अंजीर 6 मध्ये दर्शविले गेले

आकृती 6: A: ठराविक स्पिंडल-आकाराच्या मॉर्फोलॉजीसह ASCs ची प्रतिनिधी प्रतिमा.OLYMPUS सूक्ष्मदर्शकाने टिपले.मूळ मोठेीकरण, (10x).B: ASC चे ऍडिपोजेनिक भेदभाव खनिजीकरणाचे क्षेत्र दर्शविणारे रुथेनियम रेड स्टेनिंग द्वारे पुरावा आहे.OLYMPUS सूक्ष्मदर्शकाने टिपले.मूळ मोठेीकरण (10x).C: ASC चे Countstar FL व्यक्तिचित्रण.

सारांश:
काउंटस्टार FL या स्टेम पेशींचे उत्पादन आणि भिन्नता दरम्यान एकाग्रता, व्यवहार्यता आणि फेनोटाइप वैशिष्ट्यांचे (आणि त्यांचे बदल) निरीक्षण करू शकते.FCS एक्सप्रेस प्रत्येक सिग्नल सेलचे पुनरावलोकन करण्यासाठी, प्रतिमेद्वारे डेटा प्रमाणित करण्यासाठी कार्य पुरवते.काउंटस्टार रीगेलच्या परिणामांवर आधारित पुढील प्रयोग करण्यासाठी वापरकर्त्याला आत्मविश्वासही असू शकतो.काउंटस्टार रिगेल स्टेम पेशींच्या गुणवत्ता नियंत्रणासाठी जलद, अत्याधुनिक आणि विश्वासार्ह पद्धत देते.