a casa » Recursos » Mesura directa de la concentració, la viabilitat i el fenotip de cèl·lules mare mitjançant un nou citomet d'imatge

Mesura directa de la concentració, la viabilitat i el fenotip de cèl·lules mare mitjançant un nou citomet d'imatge

Resum: Les cèl·lules mare mesenquimàtiques són un subconjunt de cèl·lules mare pluripotents que es poden aïllar del mesoderm.Amb les seves característiques de renovació d'autoreplicació i diferenciació multidireccional, posseeixen un gran potencial per a diverses teràpies en medicina.Les cèl·lules mare mesenquimals tenen un fenotip immune únic i una capacitat de regulació immune.Per tant, les cèl·lules mare mesenquimals ja s'utilitzen àmpliament en trasplantaments de cèl·lules mare, enginyeria de teixits i trasplantament d'òrgans.I més enllà d'aquestes aplicacions, s'utilitzen com a eina ideal en enginyeria de teixits com a cèl·lules sembradores en una sèrie d'experiments d'investigació bàsica i clínica.Fins ara, no hi ha un mètode i un estàndard àmpliament acceptats per al control de qualitat de les cèl·lules mare mesenquimals.El Countstar Rigel pot controlar la concentració, la viabilitat i les característiques del fenotip (i els seus canvis) durant la producció i diferenciació d'aquestes cèl·lules mare.El Countstar Rigel també té l'avantatge d'obtenir informació morfològica addicional, proporcionada pels enregistraments d'imatges de camp clar permanent i basats en fluorescència durant tot el procés de control de la qualitat cel·lular.El Countstar Rigel ofereix un mètode ràpid, sofisticat i fiable per al control de qualitat de les cèl·lules mare.

Materials i mètodes:
Les cèl·lules mare mesenquimals derivades de l'adipòs (AdMSC) van ser dotades pel professor Nianmin Qi, solució de tinció AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Anticòs: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Els AdMSC es van cultivar en una incubadora humidificada a 37 ℃ i 5% de CO2.Digerir amb tripsina abans del seu ús.
Es va seguir el procediment de tinció del marcador de CD com a manual d'anticossos.
Detecció de marcadors de CD amb Countstar Rigel:
1. Es va crear un procediment d'aplicació de color de senyal configurant el canal PE a la fluorescència PE d'imatge.
2. Es van capturar 3 camps de cada cambra.
3. Un cop finalitzades les imatges i l'anàlisi inicial, el programari FCS va establir la configuració del llindar (porta de registre) per a la transfecció positiva i negativa.

Control de qualitat de les cèl·lules mare
La figura següent (figura 1) mostra el procediment de teràpia amb cèl·lules mare .

Figura 1: El procediment per a la teràpia amb cèl·lules mare

Resultats:
Determinació de la concentració, la viabilitat, el diàmetre i l'agregació d'AdMSC.
La viabilitat dels AdMSC es va determinar per AO / PI, es va crear un procediment d'aplicació de doble color configurant el canal verd i el canal vermell a la imatge de la fluorescència AO i PI, a més d'un camp brillant.A la figura 2 es van mostrar imatges d'exemple.

Figura 2. Imatges d'abans i després del transport dels AdMSC.A. Abans del transport;es mostra una imatge representativa.B. Després del transport;es mostra una imatge representativa.

La viabilitat dels AdMSC es va canviar dràsticament després del transport en comparació amb abans del transport.La viabilitat abans del transport era del 92%, però es va reduir al 71% després del transport.El resultat es va mostrar a la figura 3.

Figura 3. Els resultats de viabilitat dels AdMSC (abans del transport i després del transport)

El diàmetre i l'agregació també van ser determinats per Countstar Rigel.El diàmetre dels AdMSC es va canviar dràsticament després del transport en comparació amb abans del transport.El diàmetre abans del transport era de 19 µm, però va augmentar a 21 µm després del transport.L'agregació de abans del transport era del 20%, però va augmentar fins al 25% després del transport.A partir de les imatges capturades per Countstar Rigel, el fenotip dels AdMSC es va canviar dràsticament després del transport.Els resultats es van mostrar a la figura 4.

Figura 4: El diàmetre i els resultats de l'agregació.R: Les imatges representatives dels AdMSC, el fenotip dels AdMSC es van canviar dràsticament després del transport.B: L'agregació abans del transport era del 20%, però va augmentar fins al 25% després del transport.C: El diàmetre abans del transport era de 19 µm, però va augmentar a 21 µm després del transport.

Determineu l'immunofenotip d'AdMSC per Countstar Rigel
L'immunofenotip d'AdMSC es va determinar per Countstar Rigel, els AdMSC es van incubar amb diferents anticossos respectivament (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Es va crear un procediment d'aplicació de color de senyal configurant un canal verd per a la fluorescència de la imatge PE, a més d'un camp brillant.La segmentació de referència de la imatge de camp brillant es va aplicar com a màscara per mostrar el senyal de fluorescència PE.Es van mostrar els resultats de CD105 (figura 5).

Figura 5: els resultats de CD105 dels AdMSC van ser determinats per Countstar Rigel.R: Anàlisi quantitativa del percentatge positiu de CD105 en diferents mostres mitjançant el programari FCS express 5 plus.B: Les imatges d'alta qualitat proporcionen informació morfològica addicional.C: resultats validats per miniatures de cada cèl·lula, les eines de programari FCS van dividir les cèl·lules en diferents grups segons la seva expressió de proteïna variable.

 

Altres resultats d'anticossos es van mostrar a la figura 6

Figura 6: A: una imatge representativa d'ASC amb una morfologia típica en forma de fus.Capturada pel microscopi OLYMPUS.Ampliació original, (10x).B: La diferenciació adipogènica dels ASC s'evidencia per la tinció de vermell de ruteni que mostra àrees de mineralització.Capturada pel microscopi OLYMPUS.Ampliació original (10x).C: Caracterització Countstar FL d'ASC.

Resum:
El Countstar FL pot controlar la concentració, la viabilitat i les característiques del fenotip (i els seus canvis) durant la producció i diferenciació d'aquestes cèl·lules mare.FCS express ofereix la funció de revisar cada cèl·lula de senyal, validar les dades a través de la imatge.L'usuari també pot tenir la confiança per dur a terme els propers experiments basats en els resultats de Countstar Rigel.El Countstar Rigel ofereix un mètode ràpid, sofisticat i fiable per al control de qualitat de les cèl·lules mare.

 

descarregar

Descarregar fitxer

  • 这个字段是用于验证目的,应该保持不变。

La vostra privadesa és important per a nosaltres.

Utilitzem galetes per millorar la vostra experiència quan visiteu els nostres llocs web: les galetes de rendiment ens mostren com feu servir aquest lloc web, les galetes funcionals recorden les vostres preferències i les galetes d'orientació ens ajuden a compartir contingut rellevant per a vosaltres.

Acceptar

iniciar Sessió