Casa » Recursos » Medición directa da concentración, viabilidade e fenotipo de células nai usando un novo citometría de imaxe

Medición directa da concentración, viabilidade e fenotipo de células nai usando un novo citometría de imaxe

Resumo: As células nai mesenquimatosas son un subconxunto de células nai pluripotentes que se poden illar do mesodermo.Coas súas características de renovación de autorreplicación e diferenciación multidirección, posúen un alto potencial para varias terapias en medicina.As células nai mesenquimatosas teñen un fenotipo inmune único e unha capacidade de regulación inmune.Polo tanto, as células nai mesenquimatosas xa son moi utilizadas en transplantes de células nai, enxeñería de tecidos e transplante de órganos.E máis aló destas aplicacións, utilízanse como unha ferramenta ideal na enxeñaría de tecidos como células sementadoras nunha serie de experimentos de investigación básica e clínica.Ata agora, non existe un método e un estándar amplamente aceptados para o control de calidade das células nai mesenquimatosas.O Countstar Rigel pode controlar a concentración, a viabilidade e as características do fenotipo (e os seus cambios) durante a produción e diferenciación destas células nai.O Countstar Rigel tamén ten a vantaxe de obter información morfolóxica adicional, proporcionada polas gravacións de imaxes baseadas en fluorescencia e campo claro permanente durante todo o proceso de vixilancia da calidade celular.O Countstar Rigel ofrece un método rápido, sofisticado e fiable para o control de calidade das células nai.

Materiais e métodos:
As células nai mesenquimales derivadas de adipos (AdMSC) foron obsequiadas polo profesor Nianmin Qi, solución de tinción AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Anticorpos: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Os AdMSC cultiváronse nunha incubadora humidificada a 37 ℃ e 5 % de CO2.Dixerir con tripsina antes de usar.
Seguiuse o procedemento de tinción do marcador CD como manual de anticorpos.
Detección de marcadores de CD con Countstar Rigel:
1. Creouse un procedemento de aplicación de cor de sinal configurando a canle PE para a fluorescencia de imaxe PE.
2. Capturáronse 3 campos de cada cámara.
3. Despois de completar a imaxe e a análise inicial, a configuración do limiar (porta de rexistro) para a transfección positiva e negativa foi definida polo software FCS.

Control de calidade das células nai
A seguinte figura (Figura 1) mostra o procedemento de terapia con células nai .

Figura 1: O procedemento para a terapia con células nai

Resultados:
Determinación da concentración, viabilidade, diámetro e agregación de AdMSC.
A viabilidade dos AdMSC foi determinada por AO/PI. Creouse un procedemento de aplicación de dobre cor configurando a canle verde e a canle vermella para a fluorescencia AO e PI da imaxe, ademais dun campo brillante.Na figura 2 mostráronse imaxes de exemplo.

Figura 2. Imaxes de antes e despois do transporte dos AdMSC.A. Antes do transporte;móstrase unha imaxe representativa.B. Despois do transporte;móstrase unha imaxe representativa.

A viabilidade dos AdMSC cambiou drasticamente despois do transporte en comparación coa anterior.A viabilidade antes do transporte era do 92%, pero reduciuse ao 71% despois do transporte.O resultado mostrouse na figura 3.

Figura 3. Os resultados de viabilidade dos AdMSC (antes do transporte e despois do transporte)

O diámetro e a agregación tamén foron determinados por Countstar Rigel.O diámetro dos AdMSC cambiou drasticamente despois do transporte en comparación co anterior.O diámetro antes do transporte era de 19 µm, pero aumentou a 21 µm despois do transporte.A agregación de antes do transporte foi do 20%, pero aumentou ata o 25% despois do transporte.A partir das imaxes capturadas por Countstar Rigel, o fenotipo dos AdMSC cambiou drasticamente despois do transporte.Os resultados mostráronse na Figura 4.

Figura 4: O diámetro e os resultados da agregación.R: As imaxes representativas dos AdMSCs, o fenotipo dos AdMSC modificáronse drasticamente despois do transporte.B: A agregación antes do transporte era do 20%, pero aumentou ata o 25% despois do transporte.C: O diámetro antes do transporte era de 19 µm, pero aumentou a 21 µm despois do transporte.

Determinar o inmunofenotipo dos AdMSC por Countstar Rigel
O inmunofenotipo dos AdMSC determinouse por Countstar Rigel, os AdMSC incubáronse con anticorpos diferentes respectivamente (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Creouse un procedemento de aplicación da cor do sinal configurando unha canle verde para a fluorescencia PE de imaxe, ademais dun campo brillante.A segmentación de referencia da imaxe de campo brillante aplicouse como máscara para mostrar o sinal de fluorescencia PE.Mostráronse os resultados de CD105 (Figura 5).

Figura 5: os resultados CD105 dos AdMSC foron determinados por Countstar Rigel.R: Análise cuantitativa da porcentaxe positiva de CD105 en diferentes mostras mediante o software FCS express 5 plus.B: As imaxes de alta calidade proporcionan información morfolóxica adicional.C: Resultados validados mediante miniaturas de cada célula, as ferramentas de software FCS dividiron as células en diferentes grupos segundo a súa expresión de proteínas variable.

 

Outros resultados de anticorpos mostráronse na figura 6

Figura 6: A: unha imaxe representativa de ASC con morfoloxía típica en forma de fuso.Captado polo microscopio OLYMPUS.Aumento orixinal, (10x).B: A diferenciación adipoxénica dos ASCs é evidenciada pola tinción de vermello rutenio que mostra áreas de mineralización.Captado polo microscopio OLYMPUS.Aumento orixinal (10x).C: Caracterización Countstar FL de ASC.

Resumo:
O Countstar FL pode controlar a concentración, a viabilidade e as características do fenotipo (e os seus cambios) durante a produción e diferenciación destas células nai.FCS Express ofrece a función de revisar cada cela de sinal, validar os datos a través da imaxe.O usuario tamén pode ter a confianza para levar a cabo os próximos experimentos baseados nos resultados de Countstar Rigel.O Countstar Rigel ofrece un método rápido, sofisticado e fiable para o control de calidade das células nai.

 

Descargar

Descarga do ficheiro

  • 这个字段是用于验证目的,应该保持不变。

A túa privacidade é importante para nós.

Usamos cookies para mellorar a súa experiencia cando visita os nosos sitios web: as cookies de rendemento móstranos como usa este sitio web, as cookies funcionais lembran as súas preferencias e as cookies de orientación axúdannos a compartir contido relevante para vostede.

Aceptar

Iniciar sesión