نوول امیجنگ سائٹومیٹ کا استعمال کرتے ہوئے اسٹیم سیل کی براہ راست حراستی، قابل عملیت اور فینوٹائپ پیمائش

خلاصہ: Mesenchymal اسٹیم سیلز pluripotent اسٹیم سیلز کا ایک ذیلی سیٹ ہیں جو mesoderm سے الگ تھلگ ہوسکتے ہیں۔ان کی خود نقل کی تجدید اور کثیر جہتی تفریق کی خصوصیات کے ساتھ، وہ طب میں مختلف علاج کی اعلی صلاحیت کے مالک ہیں۔Mesenchymal اسٹیم سیلز میں ایک منفرد مدافعتی فینوٹائپ اور مدافعتی ضابطے کی صلاحیت ہوتی ہے۔لہذا، mesenchymal اسٹیم سیل پہلے سے ہی اسٹیم سیل ٹرانسپلانٹیشن، ٹشو انجینئرنگ، اور اعضاء کی پیوند کاری میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتے ہیں۔اور ان ایپلی کیشنز کے علاوہ، وہ ٹشو انجینئرنگ میں ایک مثالی ٹول کے طور پر بنیادی اور طبی تحقیقی تجربات کی ایک سیریز میں سیڈر سیلز کے طور پر استعمال ہوتے ہیں۔ابھی تک، mesenchymal اسٹیم سیلز کے کوالٹی کنٹرول کے لیے کوئی وسیع پیمانے پر قبول شدہ طریقہ اور معیار موجود نہیں ہے۔Countstar Rigel ان سٹیم سیلز کی پیداوار اور تفریق کے دوران ارتکاز، قابل عملیت، اور فینوٹائپ کی خصوصیات (اور ان کی تبدیلیوں) کی نگرانی کر سکتا ہے۔Countstar Rigel کو اضافی مورفولوجیکل معلومات حاصل کرنے میں بھی فائدہ ہے، جو سیل کے معیار کی نگرانی کے پورے عمل کے دوران مستقل روشن فیلڈ اور فلوروسینس پر مبنی تصویری ریکارڈنگ کے ذریعے فراہم کی جاتی ہے۔Countstar Rigel اسٹیم سیلز کے کوالٹی کنٹرول کے لیے ایک تیز، نفیس، اور قابل اعتماد طریقہ پیش کرتا ہے۔

مواد اور طریقے:
ایڈیپوز سے ماخوذ mesenchymal اسٹیم سیلز (AdMSCs) پروفیسر نیانمین کیوئ، AO/PI سٹیننگ سلوشن (شنگھائی روئی یو، CF002) نے تحفے میں دیئے تھے۔اینٹی باڈی: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD کمپنی)۔
AdMSCs کو 37℃، 5% CO2 humidified انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔استعمال سے پہلے ٹرپسن کے ساتھ ہضم کریں۔
اینٹی باڈی کے دستی کے طور پر سی ڈی مارکر سٹیننگ کے طریقہ کار کی پیروی کی گئی۔
Countstar Rigel کے ساتھ CD مارکر کا پتہ لگانا:
1. PE چینل کو تصویر PE فلوروسینس پر سیٹ کر کے سگنل کلر ایپلیکیشن کا طریقہ کار بنایا گیا تھا۔
2. ہر چیمبر سے 3 کھیتوں پر قبضہ کیا گیا۔
3. امیجنگ اور ابتدائی تجزیہ مکمل ہونے کے بعد، ایف سی ایس سافٹ ویئر کے ذریعے مثبت اور منفی منتقلی کے لیے حد (لاگ گیٹ) سیٹنگ کی گئی تھی۔

اسٹیم سیل کا کوالٹی کنٹرول
درج ذیل شکل (شکل 1) طریقہ کار کو ظاہر کرتی ہے۔ سٹیم سیل تھراپی .

شکل 1: اسٹیم سیل تھراپی کا طریقہ کار

نتائج:
AdMSCs کے ارتکاز، عملداری، قطر، اور جمع کا تعین کرنا۔
AdMSCs کی قابل عملیت کا تعین AO/PI کے ذریعے کیا گیا تھا، گرین چینل اور ریڈ چینل کو تصویر AO اور PI فلوروسینس کے علاوہ ایک روشن فیلڈ ترتیب دے کر ایک دوہرے رنگ کی درخواست کا طریقہ کار بنایا گیا تھا۔مثال کی تصاویر کو شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔

تصویر 2. AdMSCs کی نقل و حمل سے پہلے اور نقل و حمل کے بعد کی تصاویر۔A. نقل و حمل سے پہلے؛ایک نمائندہ تصویر دکھائی گئی ہے۔B. نقل و حمل کے بعد؛ایک نمائندہ تصویر دکھائی گئی ہے۔

نقل و حمل سے پہلے کے مقابلے میں نقل و حمل کے بعد AdMSCs کی عملداری میں زبردست تبدیلی آئی۔نقل و حمل سے پہلے قابل عملیت 92% تھی، لیکن نقل و حمل کے بعد یہ کم ہو کر 71% رہ گئی۔نتیجہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے۔

شکل 3. AdMSCs کے قابل عمل نتائج (ٹرانسپورٹ سے پہلے اور نقل و حمل کے بعد)

قطر اور جمع کا تعین بھی Countstar Rigel نے کیا تھا۔نقل و حمل سے پہلے کے مقابلے میں جب AdMSCs کا قطر نقل و حمل کے بعد یکسر بدل گیا تھا۔نقل و حمل سے پہلے قطر 19µm تھا، لیکن نقل و حمل کے بعد یہ بڑھ کر 21µm ہو گیا۔نقل و حمل سے پہلے کی جمع 20% تھی، لیکن نقل و حمل کے بعد یہ بڑھ کر 25% ہو گئی۔Countstar Rigel کے ذریعے حاصل کردہ تصاویر سے، AdMSCs کی فینوٹائپ نقل و حمل کے بعد یکسر تبدیل ہو گئی تھی۔نتائج کو شکل 4 میں دکھایا گیا ہے۔

شکل 4: قطر اور جمع کے نتائج۔A: AdMSCs کی نمائندہ تصاویر، AdMSCs کی فینوٹائپ کو نقل و حمل کے بعد یکسر تبدیل کر دیا گیا۔B: نقل و حمل سے پہلے جمع 20% تھا، لیکن نقل و حمل کے بعد یہ بڑھ کر 25% ہو گیا۔C: نقل و حمل سے پہلے قطر 19µm تھا، لیکن نقل و حمل کے بعد یہ بڑھ کر 21µm ہو گیا۔

Countstar Rigel کے ذریعہ AdMSCs کے امیونو فینوٹائپ کا تعین کریں۔
AdMSCs کے امیونو فینوٹائپ کا تعین Countstar Rigel کے ذریعے کیا گیا تھا، AdMSCs کو بالترتیب مختلف اینٹی باڈیز (CD29، CD34، CD45، CD56، CD73، CD105، HLA-DR) سے لگایا گیا تھا۔ایک سگنل کلر ایپلیکیشن کا طریقہ کار گرین چینل کو امیج PE فلوروسینس کے علاوہ ایک روشن فیلڈ میں ترتیب دے کر بنایا گیا تھا۔PE فلوروسینس سگنل کے نمونے کے لیے برائٹ فیلڈ پکچر ریفرنس سیگمنٹیشن کو ماسک کے طور پر لاگو کیا گیا تھا۔CD105 کے نتائج دکھائے گئے (شکل 5)۔

شکل 5: AdMSCs کے CD105 نتائج کا تعین Countstar Rigel کے ذریعے کیا گیا۔A: FCS ایکسپریس 5 پلس سافٹ ویئر کے ذریعے مختلف نمونوں میں CD105 کے مثبت فیصد کا مقداری تجزیہ۔B: اعلیٰ معیار کی تصاویر اضافی مورفولوجیکل معلومات فراہم کرتی ہیں۔C: ہر ایک سیل کے تھمب نیلز کے ذریعے توثیق شدہ نتائج، FCS سافٹ ویئر ٹولز نے خلیوں کو ان کے مختلف پروٹین ایکسپریشن کے مطابق مختلف گروپوں میں تقسیم کیا۔

دیگر اینٹی باڈیز کے نتائج تصویر 6 میں دکھائے گئے تھے۔

شکل 6: A: مخصوص تکلی کی شکل والی شکل کے ساتھ ASCs کی نمائندہ تصویر۔OLYMPUS خوردبین کے ذریعے پکڑا گیا۔اصل اضافہ، (10x)۔B: ASCs کے اڈیپوجینک تفریق کا ثبوت روتھینیم ریڈ سٹیننگ سے ہوتا ہے جو معدنیات کے علاقوں کو دکھاتا ہے۔OLYMPUS خوردبین کے ذریعے پکڑا گیا۔اصل اضافہ (10x)۔C: ASCs کی Countstar FL کی خصوصیت۔

خلاصہ:
Countstar FL ان سٹیم سیلز کی پیداوار اور تفریق کے دوران ارتکاز، قابل عملیت، اور فینوٹائپ کی خصوصیات (اور ان کی تبدیلیوں) کی نگرانی کر سکتا ہے۔FCS ایکسپریس ہر سگنل سیل کا جائزہ لینے، تصویر کے ذریعے ڈیٹا کی توثیق کرنے کے لیے فنکشن فراہم کرتا ہے۔صارف کاؤنٹ اسٹار ریگل کے نتائج کی بنیاد پر اگلے تجربات کرنے کا اعتماد بھی حاصل کر سکتا ہے۔Countstar Rigel اسٹیم سیلز کے کوالٹی کنٹرول کے لیے ایک تیز، نفیس، اور قابل اعتماد طریقہ پیش کرتا ہے۔