उपन्यास इमेजिङ साइटोमेट प्रयोग गरेर स्टेम सेलको प्रत्यक्ष एकाग्रता, व्यवहार्यता र फेनोटाइप मापन

सार: Mesenchymal स्टेम सेलहरू pluripotent स्टेम कोशिकाहरूको एक उपसमूह हो जुन मेसोडर्मबाट अलग गर्न सकिन्छ।तिनीहरूको स्व-प्रतिकृति नवीकरण र बहु-दिशा भिन्नता विशेषताहरूको साथ, तिनीहरूसँग चिकित्सामा विभिन्न उपचारहरूको लागि उच्च क्षमता छ।Mesenchymal स्टेम सेलहरूसँग एक अद्वितीय प्रतिरक्षा फेनोटाइप र प्रतिरक्षा विनियमन क्षमता छ।त्यसकारण, मेसेन्काइमल स्टेम सेलहरू पहिले नै स्टेम सेल प्रत्यारोपण, टिस्यु इन्जिनियरिङ, र अंग प्रत्यारोपणमा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ।र यी अनुप्रयोगहरू बाहेक, तिनीहरू आधारभूत र क्लिनिकल अनुसन्धान प्रयोगहरूको श्रृंखलामा सीडर सेलहरूको रूपमा टिश्यू इन्जिनियरिङमा एक आदर्श उपकरणको रूपमा प्रयोग गरिन्छ।अहिले सम्म, मेसेन्काइमल स्टेम सेलहरूको गुणस्तर नियन्त्रणको लागि व्यापक रूपमा स्वीकृत विधि र मानक छैन।काउन्टस्टार रिगेलले यी स्टेम सेलहरूको उत्पादन र भिन्नताको समयमा एकाग्रता, व्यवहार्यता, र फेनोटाइप विशेषताहरू (र तिनीहरूको परिवर्तनहरू) निगरानी गर्न सक्छ।काउन्टस्टार रिगेलले सेल गुणस्तर अनुगमनको सम्पूर्ण प्रक्रियामा स्थायी ब्राइटफिल्ड र फ्लोरोसेन्स-आधारित छवि रेकर्डिङहरूद्वारा प्रदान गरिएको अतिरिक्त मोर्फोलॉजिकल जानकारी प्राप्त गर्नमा पनि फाइदा छ।Countstar Rigel ले स्टेम सेलहरूको गुणस्तर नियन्त्रणको लागि छिटो, परिष्कृत र भरपर्दो विधि प्रदान गर्दछ।

सामग्री र विधिहरू:
Adipose-व्युत्पन्न mesenchymal स्टेम सेल (AdMSCs) प्रोफेसर Nianmin Qi, AO/PI स्टेनिंग समाधान (Shanghai RuiYu, CF002) द्वारा उपहार दिएका थिए।एन्टिबडी: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD कम्पनी)।
AdMSCs 37℃, 5% CO2 आर्द्रतायुक्त इनक्यूबेटरमा कल्चर गरिएको थियो।प्रयोग गर्नु अघि ट्रिप्सिनको साथ पाचन गर्नुहोस्।
CD मार्कर दाग प्रक्रिया एन्टिबडी को म्यानुअल रूपमा पछ्याइएको थियो।
Countstar Rigel संग CD मार्कर पत्ता लगाउने:
1. एक संकेत-रङ अनुप्रयोग प्रक्रिया PE च्यानल छवि PE प्रतिदीप्ति सेट गरेर सिर्जना गरिएको थियो।
2. प्रत्येक चेम्बरबाट 3 क्षेत्रहरू कब्जा गरियो।
3. इमेजिङ र प्रारम्भिक विश्लेषण पूरा भएपछि, FCS सफ्टवेयरद्वारा सकारात्मक र नकारात्मक ट्रान्सफेक्सनको लागि थ्रेसहोल्ड (लग गेट) सेटिङ सेट गरिएको थियो।

स्टेम सेलको गुणस्तर नियन्त्रण
निम्न चित्र (चित्र 1) को प्रक्रिया देखाउँछ स्टेम सेल थेरापी ।

चित्र १: स्टेम सेल थेरापीको लागि प्रक्रिया

परिणामहरू:
AdMSCs को एकाग्रता, व्यवहार्यता, व्यास, र एकत्रीकरण निर्धारण गर्दै।
AdMSCs को व्यवहार्यता AO/PI द्वारा निर्धारण गरिएको थियो, AO र PI फ्लोरोसेन्स छविमा ग्रीन च्यानल र रातो च्यानल सेट गरेर एक दोहोरो-रङ अनुप्रयोग प्रक्रिया सिर्जना गरिएको थियो, साथै उज्यालो क्षेत्र।उदाहरण छविहरू चित्र 2 मा देखाइएको थियो।

चित्र २. AdMSCs को ढुवानी अघि र ढुवानी पछिको छविहरू।A. यातायात अघि;एक प्रतिनिधि छवि देखाइएको छ।B. यातायात पछि;एक प्रतिनिधि छवि देखाइएको छ।

यातायात अघिको तुलनामा यातायात पछि AdMSCs को व्यवहार्यतामा ठूलो परिवर्तन भयो।ढुवानी अघिको व्यवहार्यता ९२% थियो, तर ढुवानी पछि ७१% मा घट्यो।परिणाम चित्र 3 मा देखाइएको थियो।

चित्र 3. AdMSCs को व्यवहार्यता परिणामहरू (यातायात अघि र यातायात पछि)

काउन्टस्टार रिगेल द्वारा व्यास र एकत्रीकरण पनि निर्धारण गरिएको थियो।यातायात अघिको तुलनामा यातायात पछि AdMSCs को व्यास एकदमै परिवर्तन भएको थियो।ढुवानी अघि व्यास 19µm थियो, तर यातायात पछि यो 21µm मा बढ्यो।ढुवानी अघिको जम्मा २०% थियो, तर ढुवानी पछि बढेर २५% पुगेको छ ।काउन्टस्टार रिगेलले खिचेका तस्बिरहरूबाट, यातायात पछि AdMSCs को फेनोटाइप एकदमै परिवर्तन भयो।परिणामहरू चित्र 4 मा देखाइएको थियो।

चित्र 4: व्यास र एकत्रीकरण परिणामहरू।A: AdMSCs को प्रतिनिधि छविहरू, AdMSCs को फेनोटाइप यातायात पछि एकदमै परिवर्तन भयो।B: ढुवानी अघिको जम्मा २०% थियो, तर ढुवानी पछि बढेर २५% भयो।C: ढुवानी अघि व्यास 19µm थियो, तर यो यातायात पछि 21µm मा बढ्यो।

Countstar Rigel द्वारा AdMSCs को इम्युनोफेनोटाइप निर्धारण गर्नुहोस्
AdMSCs को immunophenotype Countstar Rigel द्वारा निर्धारण गरिएको थियो, AdMSCs क्रमशः विभिन्न एन्टिबडी (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) संग इन्क्युबेटेड थिए।एक संकेत-रङ अनुप्रयोग प्रक्रिया छवि PE प्रतिदीप्ति, साथै एक उज्यालो क्षेत्र मा हरियो च्यानल सेट गरेर सिर्जना गरिएको थियो।उज्यालो क्षेत्र चित्र सन्दर्भ विभाजन मास्कको रूपमा PE प्रतिदीप्ति संकेत नमूनाको रूपमा लागू गरिएको थियो।CD105 को नतिजा देखाइयो (चित्र 5)।

चित्र 5: AdMSCs को CD105 परिणामहरू काउन्टस्टार रिगेल द्वारा निर्धारण गरिएको थियो।A: FCS एक्सप्रेस 5 प्लस सफ्टवेयर द्वारा विभिन्न नमूनाहरूमा CD105 को सकारात्मक प्रतिशतको मात्रात्मक विश्लेषण।B: उच्च-गुणस्तरका तस्बिरहरूले थप रूपात्मक जानकारी प्रदान गर्दछ।C: प्रत्येक एकल कक्षको थम्बनेलहरूद्वारा प्रमाणित नतिजाहरू, FCS सफ्टवेयर उपकरणहरूले तिनीहरूको फरक प्रोटीन अभिव्यक्ति अनुसार कक्षहरूलाई विभिन्न समूहहरूमा विभाजन गर्यो।

अन्य एन्टिबडी परिणामहरू चित्र 6 मा देखाइएको थियो

चित्र 6: A: विशिष्ट स्पिन्डल-आकारको आकारविज्ञानको साथ ASCs को प्रतिनिधि छवि।OLYMPUS माइक्रोस्कोप द्वारा कब्जा।मूल म्याग्निफिकेसन, (१०x)।B: ASCs को एडिपोजेनिक भिन्नता रुथेनियम रेड स्टेनिंगले खनिजीकरणको क्षेत्रहरू देखाउँदै प्रमाणित गरेको छ।OLYMPUS माइक्रोस्कोप द्वारा कब्जा।मूल म्याग्निफिकेसन (१०x)।C: ASCs को Countstar FL विशेषता।

सारांश:
काउन्टस्टार FL ले यी स्टेम सेलहरूको उत्पादन र भिन्नताको समयमा एकाग्रता, व्यवहार्यता, र फेनोटाइप विशेषताहरू (र तिनीहरूको परिवर्तनहरू) निगरानी गर्न सक्छ।FCS एक्सप्रेसले प्रत्येक सिग्नल सेलको समीक्षा गर्न, छवि मार्फत डेटा मान्य गर्न प्रकार्य आपूर्ति गर्दछ।प्रयोगकर्ताले काउन्टस्टार रिजेल परिणामहरूमा आधारित अर्को प्रयोगहरू पूरा गर्न आत्मविश्वास पनि पाउन सक्छ।Countstar Rigel ले स्टेम सेलहरूको गुणस्तर नियन्त्रणको लागि छिटो, परिष्कृत र भरपर्दो विधि प्रदान गर्दछ।