Апстрактан: Мезенхималне матичне ћелије су подскуп плурипотентних матичних ћелија које се могу изоловати из мезодерма.Са својим карактеристикама обнављања саморепликације и вишесмерне диференцијације, поседују висок потенцијал за различите терапије у медицини.Мезенхималне матичне ћелије имају јединствен имуни фенотип и способност имунолошке регулације.Стога се мезенхимске матичне ћелије већ широко користе у трансплантацији матичних ћелија, ткивном инжењерингу и трансплантацији органа.И поред ових примена, они се користе као идеално средство у ткивном инжењерингу као ћелије за сејање у низу основних и клиничких истраживачких експеримената.До сада не постоји широко прихваћен метод и стандард за контролу квалитета мезенхимских матичних ћелија.Цоунтстар Ригел може да прати концентрацију, виталност и карактеристике фенотипа (и њихове промене) током производње и диференцијације ових матичних ћелија.Цоунтстар Ригел такође има предност у добијању додатних морфолошких информација, обезбеђених сталним светлосним пољем и снимцима слика заснованим на флуоресценцији током целог процеса праћења квалитета ћелија.Цоунтстар Ригел нуди брзу, софистицирану и поуздану методу за контролу квалитета матичних ћелија.
Материјали и методе:
Мезенхимске матичне ћелије добијене од масноће (АдМСЦ) поклонио је професор Нианмин Ки, раствор за бојење АО/ПИ (Схангхаи РуиИу, ЦФ002).Антитело: ЦД29, ЦД34, ЦД45, ЦД56, ЦД73, ЦД105, ХЛАДР (компанија БД).
АдМСЦ су култивисани у инкубатору са влажним 37 ℃, 5% ЦО2.Пре употребе пробавити са трипсином.
Процедура бојења ЦД маркера је праћена као приручник за антитела.
Детекција ЦД маркера са Цоунтстар Ригелом:
1. Процедура примене боје сигнала је креирана тако што је ПЕ канал постављен на слику ПЕ флуоресценције.
2. Из сваке коморе су ухваћена 3 поља.
3. Након што су снимање и почетна анализа завршени, подешавање прага (лог гате) за позитивну и негативну трансфекцију је постављено помоћу ФЦС софтвера.
Контрола квалитета матичних ћелија
На следећој слици (слика 1) приказан је поступак терапија матичним ћелијама .
Слика 1: Поступак за терапију матичним ћелијама
Резултати:
Одређивање концентрације, одрживости, пречника и агрегације АдМСЦ-а.
Вијабилност АдМСЦ-а је одређена помоћу АО/ПИ. Процедура примене у две боје је креирана постављањем зеленог канала и црвеног канала на слику АО и ПИ флуоресценције, плус светло поље.Примери слика су приказани на слици 2.
Слика 2. Слике пре транспорта и после транспорта АдМСЦ-а.А. Пре транспорта;приказана је репрезентативна слика.Б. После транспорта;приказана је репрезентативна слика.
Одрживост АдМСЦ-а је драстично промењена након транспорта у поређењу са пре транспорта.Одрживост пре транспорта била је 92%, али је смањена на 71% након транспорта.Резултат је приказан на слици 3.
Слика 3. Резултати одрживости АдМСЦ-а (пре транспорта и после транспорта)
Пречник и агрегацију је такође одредио Цоунтстар Ригел.Пречник АдМСЦ-а је драстично промењен након транспорта у поређењу са пре транспорта.Пре транспорта је пречник био 19 µм, али се након транспорта повећао на 21 µм.Агрегација пре транспорта била је 20%, али се повећала на 25% након транспорта.Са слика које је снимио Цоунтстар Ригел, фенотип АдМСЦ-а је драстично промењен након транспорта.Резултати су приказани на слици 4.
Слика 4: Пречник и резултати агрегације.О: Репрезентативне слике АдМСЦ-а, фенотип АдМСЦ-а су драстично промењени након транспорта.Б: Агрегација пре транспорта била је 20%, али се повећала на 25% након транспорта.Ц: Пре транспорта је пречник био 19 µм, али се након транспорта повећао на 21 µм.
Одредите имунофенотип АдМСЦ-а од стране Цоунтстар Ригела
Имунофенотип АдМСЦ-а је одредио Цоунтстар Ригел, АдМСЦ-ови су инкубирани са различитим антителима (ЦД29, ЦД34, ЦД45, ЦД56, ЦД73, ЦД105, ХЛА-ДР).Процедура примене боје сигнала је креирана постављањем зеленог канала за слику ПЕ флуоресценције, плус светло поље.Референтна сегментација слике светлог поља је примењена као маска за узорковање ПЕ флуоресцентног сигнала.Приказани су резултати ЦД105 (слика 5).
Слика 5: ЦД105 резултате АдМСЦ-а одредио је Цоунтстар Ригел.О: Квантитативна анализа позитивног процента ЦД105 у различитим узорцима помоћу софтвера ФЦС екпресс 5 плус.Б: Висококвалитетне слике пружају додатне морфолошке информације.Ц: Потврђени резултати помоћу сличица сваке појединачне ћелије, ФЦС софтверски алати су поделили ћелије у различите групе у складу са њиховом различитом експресијом протеина.
Остали резултати антитела су приказани на слици 6
Слика 6: А: Репрезентативна слика АСЦ са типичном морфологијом у облику вретена.Снимљено микроскопом ОЛИМПУС.Оригинално увећање, (10к).Б: Адипогена диференцијација АСЦ-а је доказана бојењем рутенијум црвеном која показује подручја минерализације.Снимљено микроскопом ОЛИМПУС.Оригинално увећање (10к).Ц: Цоунтстар ФЛ карактеризација АСЦ-а.
резиме:
Цоунтстар ФЛ може да прати концентрацију, виталност и карактеристике фенотипа (и њихове промене) током производње и диференцијације ових матичних ћелија.ФЦС екпресс обезбеђује функцију за преглед сваке сигналне ћелије, валидацију података кроз слику.Корисник такође може имати самопоуздања да спроведе следеће експерименте на основу резултата Цоунтстар Ригел.Цоунтстар Ригел нуди брзу, софистицирану и поуздану методу за контролу квалитета матичних ћелија.
