Muhtasari: Seli za shina za mesenchymal ni seti ndogo ya seli shina za pluripotent ambazo zinaweza kutengwa na mesoderm.Kwa sifa zao za kujirudiarudia na kutofautisha pande nyingi, wana uwezo mkubwa wa matibabu mbalimbali katika dawa.Seli za shina za mesenchymal zina phenotype ya kipekee ya kinga na uwezo wa udhibiti wa kinga.Kwa hivyo, seli za shina za mesenchymal tayari zinatumiwa sana katika upandikizaji wa seli za shina, uhandisi wa tishu, na upandikizaji wa chombo.Na Zaidi ya matumizi haya, hutumiwa kama zana bora katika uhandisi wa tishu kama seli za mbegu katika safu ya majaribio ya kimsingi na ya kliniki ya utafiti.Hadi sasa, hakuna mbinu na kiwango kinachokubalika na wengi cha udhibiti wa ubora wa seli za shina za mesenchymal.Countstar Rigel inaweza kufuatilia ukolezi, uwezo na sifa za phenotype (na mabadiliko yao) wakati wa uzalishaji na upambanuzi wa seli shina hizi.Countstar Rigel pia ina faida katika kupata maelezo ya ziada ya kimofolojia, yanayotolewa na rekodi za picha za uwanda wa kudumu na zenye msingi wa fluorescence wakati wa mchakato mzima wa ufuatiliaji wa ubora wa seli.Countstar Rigel inatoa mbinu ya haraka, ya kisasa na ya kuaminika kwa udhibiti wa ubora wa seli shina.
Nyenzo na njia:
Seli za shina za mesenchymal zinazotokana na adipose (AdMSCs) zilipewa zawadi na Profesa Nianmin Qi, AO/PI myeyusho wa madoa (Shanghai RuiYu, CF002).Kingamwili: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC zilikuzwa katika incubator iliyo na unyevu wa 37℃, 5% ya CO2.Digest na trypsin kabla ya matumizi.
Utaratibu wa kuweka alama kwenye CD ulifuatwa kama mwongozo wa kingamwili.
Utambuzi wa alama ya CD na Countstar Rigel:
1. Utaratibu wa utumaji wa rangi ya mawimbi uliundwa kwa kuweka chaneli ya PE kwenye taswira ya PE fluorescence.
2. Mashamba 3 yalitekwa kutoka kwa kila chumba.
3. Baada ya kupiga picha na uchanganuzi wa awali kukamilika, mpangilio wa kizingiti (lango la logi) kwa uhamishaji chanya na hasi uliwekwa na programu ya FCS.
Udhibiti wa ubora wa seli za shina
Kielelezo kifuatacho (Kielelezo 1) kinaonyesha utaratibu wa matibabu ya seli za shina .
Kielelezo 1: Utaratibu wa matibabu ya seli shina
Matokeo:
Kubainisha mkusanyiko, uwezekano, kipenyo, na ujumlishaji wa AdMSC.
Ufanisi wa AdMSCs ulibainishwa na AO/PI, Utaratibu wa maombi ya rangi mbili uliundwa kwa kuweka chaneli ya Kijani na chaneli Nyekundu ili kupiga picha AO na PI fluorescence, pamoja na uga angavu.Picha za mfano zilionyeshwa kwenye Kielelezo 2.
Kielelezo 2. Picha za kabla ya usafiri na baada ya usafirishaji wa AdMSC.A. Kabla ya usafiri;picha ya mwakilishi imeonyeshwa.B. Baada ya usafiri;picha ya mwakilishi imeonyeshwa.
Ufanisi wa AdMSC ulibadilishwa kwa kiasi kikubwa baada ya usafiri ikilinganishwa na kabla ya usafiri.Ufanisi kabla ya usafiri ulikuwa 92%, lakini ulipungua hadi 71% baada ya usafiri.Matokeo yameonyeshwa kwenye Mchoro 3.
Mchoro 3. Matokeo ya utendakazi ya AdMSCs (Kabla ya usafirishaji na baada ya usafirishaji)
Kipenyo na mkusanyiko pia viliamuliwa na Countstar Rigel.Kipenyo cha AdMSC kilibadilishwa kwa kiasi kikubwa baada ya usafiri ikilinganishwa na kabla ya usafiri.Kipenyo kabla ya usafiri kilikuwa 19µm, lakini kiliongezeka hadi 21µm baada ya usafiri.Mkusanyiko wa kabla ya usafiri ulikuwa 20%, lakini uliongezeka hadi 25% baada ya usafiri.Kutoka kwa picha zilizopigwa na Countstar Rigel, aina ya AdMSCs ilibadilishwa kwa kiasi kikubwa baada ya usafiri.Matokeo yameonyeshwa kwenye Kielelezo 4.
Kielelezo cha 4: Kipenyo na matokeo ya kujumlisha.J: Picha wakilishi za AdMSC, aina ya AdMSC zilibadilishwa kwa kiasi kikubwa baada ya usafiri.B: Mjumuisho kabla ya usafiri ulikuwa 20%, lakini uliongezeka hadi 25% baada ya usafirishaji.C: Kipenyo kabla ya usafiri kilikuwa 19µm, lakini kiliongezeka hadi 21µm baada ya usafiri.
Amua aina ya kingamwili ya AdMSCs na Countstar Rigel
Aina ya kingamwili ya AdMSCs iliamuliwa na Countstar Rigel, AdMSCs ziliwekwa ndani na kingamwili tofauti mtawalia (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Utaratibu wa utumaji wa rangi ya mawimbi uliundwa kwa kuweka chaneli ya Kijani ili kuweka picha ya PE fluorescence, pamoja na sehemu angavu.Sehemu angavu ya marejeleo ya picha ilitumika kama kinyago ili sampuli ya mawimbi ya PE ya umeme.Matokeo ya CD105 yalionyeshwa (Mchoro 5).
Kielelezo 5: Matokeo ya CD105 ya AdMSC yalibainishwa na Countstar Rigel.J: Uchambuzi wa kiasi cha asilimia chanya ya CD105 katika sampuli tofauti na programu ya FCS express 5 plus.B: Picha za ubora wa juu hutoa maelezo ya ziada ya kimofolojia.C: Matokeo yaliyoidhinishwa kwa vijipicha vya kila seli moja, zana za programu za FCS ziligawanya seli katika vikundi tofauti kulingana na mwonekano wao tofauti wa protini.
Matokeo mengine ya kingamwili yameonyeshwa kwenye Mchoro 6
Kielelezo 6: A: Taswira wakilishi ya ASC zenye mofolojia ya kawaida yenye umbo la spindle.Imenaswa kwa hadubini ya OLYMPUS.Ukuzaji asilia, (10x).B: Utofautishaji wa Adipojeni wa ASC unathibitishwa na rangi ya Ruthenium Red inayoonyesha maeneo ya utiaji madini.Imenaswa kwa hadubini ya OLYMPUS.Ukuzaji asilia (10x).C: Tabia za Countstar FL za ASC.
Muhtasari:
Countstar FL inaweza kufuatilia umakinifu, uwezekano, na sifa za phenotype (na mabadiliko yao) wakati wa uzalishaji na upambanuzi wa seli shina hizi.FCS Express hutoa utendakazi kukagua kila seli ya mawimbi, kuthibitisha data kupitia picha.Mtumiaji pia anaweza kuwa na imani ya kufanya majaribio yanayofuata kulingana na matokeo ya Countstar Rigel.Countstar Rigel inatoa mbinu ya haraka, ya kisasa na ya kuaminika kwa udhibiti wa ubora wa seli shina.
