စိတ္တဇ- Mesenchymal ပင်မဆဲလ်များသည် mesoderm မှခွဲထုတ်နိုင်သည့် pluripotent ပင်မဆဲလ်များ၏ အစုခွဲတစ်ခုဖြစ်သည်။၎င်းတို့၏ ကိုယ်တိုင်ပုံတူပွားခြင်း သက်တမ်းတိုးခြင်းနှင့် လမ်းကြောင်းပေါင်းစုံ ကွဲပြားခြင်းလက္ခဏာများဖြင့် ၎င်းတို့သည် ဆေးပညာဆိုင်ရာ အမျိုးမျိုးသော ကုထုံးများအတွက် မြင့်မားသော အလားအလာရှိသည်။Mesenchymal ပင်မဆဲလ်များသည် ထူးခြားသောကိုယ်ခံစွမ်းအား phenotype နှင့် ကိုယ်ခံအားထိန်းညှိနိုင်စွမ်းရှိသည်။ထို့ကြောင့်၊ mesenchymal ပင်မဆဲလ်များကို ပင်မဆဲလ်အစားထိုးခြင်း၊ တစ်ရှူးအင်ဂျင်နီယာနှင့် ကိုယ်တွင်းအင်္ဂါအစားထိုးခြင်းများတွင် တွင်ကျယ်စွာအသုံးပြုနေပြီဖြစ်သည်။ဤအပလီကေးရှင်းများအပြင်၊ ၎င်းတို့ကို အခြေခံနှင့် လက်တွေ့သုတေသနစမ်းသပ်မှုများဆက်တိုက်တွင် မျိုးစေ့ဆဲလ်များအဖြစ် တစ်ရှူးအင်ဂျင်နီယာဆိုင်ရာ စံပြကိရိယာအဖြစ် အသုံးပြုကြသည်။ယခုအချိန်အထိ mesenchymal ပင်မဆဲလ်များ၏ အရည်အသွေးကို ထိန်းချုပ်ရန်အတွက် တွင်ကျယ်စွာ လက်ခံထားသော နည်းလမ်းနှင့် စံမရှိပါ။Countstar Rigel သည် ဤပင်မဆဲလ်များ၏ ထုတ်လုပ်မှုနှင့် ကွဲပြားနေစဉ်အတွင်း အာရုံစူးစိုက်မှု၊ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းနှင့် ဖီနိုအမျိုးအစားလက္ခဏာများ (၎င်းတို့၏ပြောင်းလဲမှုများ) ကို စောင့်ကြည့်နိုင်သည်။Countstar Rigel သည် ဆဲလ်အရည်အသွေးစောင့်ကြည့်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးအတွင်း အမြဲတမ်းတောက်ပသောနယ်ပယ်နှင့် fluorescence-based ရုပ်ပုံမှတ်တမ်းတင်မှုများမှ ပံ့ပိုးပေးသည့် ထပ်လောင်းရုပ်ပုံသဏ္ဌာန်အချက်အလက်များကို ရယူရာတွင်လည်း အားသာချက်ရှိသည်။Countstar Rigel သည် ပင်မဆဲလ်များ၏ အရည်အသွေးကို ထိန်းချုပ်ရန်အတွက် မြန်ဆန်ပြီး ခေတ်မီပြီး ယုံကြည်စိတ်ချရသော နည်းလမ်းကို ပေးဆောင်ပါသည်။
ကုန်ကြမ်းနှင့်နည်းစနစ်များ:
အဆီဓာတ်မှရရှိသော mesenchymal ပင်မဆဲလ်များ (AdMSCs) ကို ပရော်ဖက်ဆာ Nianmin Qi၊ AO/PI စွန်းထင်းဆေးရည် (Shanghai RuiYu, CF002) မှ လက်ဆောင်ပေးခဲ့ပါသည်။ပဋိပစ္စည်း- CD29၊ CD34၊ CD45၊ CD56၊ CD73၊ CD105၊ HLADR (BD ကုမ္ပဏီ)။
AdMSC များကို 37 ℃ ၊ 5% CO2 စိုစွတ်သော စက်ရုံတွင် မွေးမြူထားသည်။အသုံးမပြုမီ trypsin ဖြင့် အစာချေပါ။
CD အမှတ်အသား ရောင်ခြယ်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ကို ပဋိပစ္စည်း၏လက်စွဲအတိုင်း လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။
Countstar Rigel ဖြင့် CD အမှတ်အသား ထောက်လှမ်းခြင်း-
1. PE ချန်နယ်ကို ပုံသဏ္ဌာန် PE fluorescence သို့ သတ်မှတ်ခြင်းဖြင့် signal-color application လုပ်ငန်းစဉ်ကို ဖန်တီးထားသည်။
2. အခန်းတစ်ခုစီမှ နယ်ပယ် 3 ခုကို သိမ်းပိုက်ခဲ့သည်။
3. ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းနှင့် ကနဦးပိုင်းခြားစိတ်ဖြာမှု ပြီးမြောက်ပြီးနောက်၊ FCS ဆော့ဖ်ဝဲလ်မှ အပြုသဘောဆောင်သော ကူးပြောင်းခြင်းအတွက် တံခါးပေါက် (လော့ဂ်ဂိတ်) ဆက်တင်ကို သတ်မှတ်ပေးခဲ့သည်။
ပင်မဆဲလ်များ၏အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
အောက်ပါပုံ (ပုံ 1) ၏လုပ်ထုံးလုပ်နည်းကိုပြသထားတယ်။ ပင်မဆဲလ်ကုထုံး .
ပုံ 1- ပင်မဆဲလ်ကုထုံးအတွက် လုပ်ထုံးလုပ်နည်း
ရလဒ်များ
AdMSC များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု၊ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း၊ အချင်းနှင့် ပေါင်းစည်းမှုကို ဆုံးဖြတ်ခြင်း။
AdMSCs များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို AO/PI မှ ဆုံးဖြတ်ပေးသည်၊၊ အစိမ်းရောင်ချန်နယ်နှင့် အနီရောင်ချန်နယ်ကို ပုံ AO နှင့် PI အလင်းတောက်တောက်အပြင် တောက်ပသောအကွက်အဖြစ် သတ်မှတ်ခြင်းဖြင့် ရောင်စုံနှစ်ရောင်လျှောက်လွှာလုပ်ငန်းစဉ်ကို ဖန်တီးထားသည်။နမူနာပုံများကို ပုံ 2 တွင် ပြထားသည်။
ပုံ 2. သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီနှင့် AdMSC များ၏သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက်ပုံများ။A. ပို့ဆောင်ခြင်းမပြုမီ၊ကိုယ်စားပြုပုံတစ်ခုပြထားသည်။B. သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးပြီးနောက်;ကိုယ်စားပြုပုံတစ်ခုပြထားသည်။
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက AdMSC များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းသည် သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအပြီးတွင် သိသိသာသာ ပြောင်းလဲသွားသည်။သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းမှာ ၉၂% ဖြစ်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက် ၇၁% သို့ လျော့ကျသွားသည်။ရလဒ်ကို ပုံ ၃ တွင် ပြထားသည်။
ပုံ 3။ AdMSC များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းရလဒ်များ (သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီနှင့် သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက်)
အချင်းနှင့် စုစည်းမှုကိုလည်း Countstar Rigel မှ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက AdMSC များ၏ အချင်းသည် သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအပြီးတွင် သိသိသာသာ ပြောင်းလဲသွားပါသည်။ပို့ဆောင်ခြင်းမပြုမီ အချင်းသည် 19µm ဖြစ်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက် 21µm အထိ တိုးလာသည်။သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီ စုစည်းမှုသည် 20% ဖြစ်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက် 25% အထိ တိုးလာခဲ့သည်။Countstar Rigel မှရိုက်ကူးထားသောပုံများမှ AdMSCs ၏ phenotype သည် သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအပြီးတွင် သိသိသာသာပြောင်းလဲသွားသည်။ရလဒ်များကို ပုံ 4 တွင်ပြသထားသည်။
ပုံ 4- အချင်းနှင့် ပေါင်းစည်းမှု ရလဒ်များ။A- AdMSCs များ၏ ကိုယ်စားပြုပုံများ၊ AdMSCs များ၏ phenotype သည် သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအပြီးတွင် သိသိသာသာပြောင်းလဲသွားပါသည်။B- သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးမတိုင်မီ စုစည်းမှုသည် 20% ဖြစ်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက် 25% အထိ တိုးလာပါသည်။C- ပို့ဆောင်ခြင်းမပြုမီ အချင်းသည် 19µm ဖြစ်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ပြီးနောက် 21µm အထိ တိုးလာသည်။
Countstar Rigel မှ AdMSCs ၏ immunophenotype ကိုသတ်မှတ်ပါ။
AdMSC ၏ immunophenotype ကို Countstar Rigel မှ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်၊ AdMSC များကို မတူညီသော ပဋိပစ္စည်းအသီးသီးဖြင့် ပေါက်ဖွားခဲ့သည် (CD29၊ CD34၊ CD45၊ CD56၊ CD73၊ CD105၊ HLA-DR)။စိမ်းလန်းသောချန်နယ်ကို ပုံသဏ္ဌာန် PE အလင်းရောင်နှင့် တောက်ပသော အကွက်တစ်ခုအဖြစ် သတ်မှတ်ခြင်းဖြင့် အချက်ပြအရောင် အသုံးချမှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို ဖန်တီးထားသည်။PE မီးချောင်းအချက်ပြမှုကို နမူနာယူရန် တောက်ပသောအကွက်ပုံ ရည်ညွှန်းခြင်း အပိုင်းခွဲခြင်းကို မျက်နှာဖုံးတစ်ခုအဖြစ် အသုံးပြုထားသည်။CD105 ၏ရလဒ်များ (ပုံ 5) ကိုပြသခဲ့သည်။
ပုံ 5- AdMSC များ၏ CD105 ရလဒ်များကို Countstar Rigel မှ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။A- FCS express 5 plus software ဖြင့် မတူညီသော နမူနာများတွင် CD105 ၏ အပြုသဘောရာခိုင်နှုန်းကို အရေအတွက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။B- အရည်အသွေးမြင့် ရုပ်ပုံများသည် နောက်ထပ် ပုံသဏ္ဍာန်ဆိုင်ရာ အချက်အလက်များကို ပံ့ပိုးပေးသည်။C- ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီ၏ ပုံသေးများဖြင့် သက်သေပြထားသော ရလဒ်များ၊ FCS ဆော့ဖ်ဝဲကိရိယာများသည် ၎င်းတို့၏ကွဲပြားသော ပရိုတင်းဖော်ပြမှုအရ ဆဲလ်များကို ကွဲပြားသောအုပ်စုများအဖြစ် ခွဲခြားထားသည်။
အခြားပဋိပစ္စည်းရလဒ်များကို ပုံ 6 တွင်ပြသထားသည်။
ပုံ 6- A- ပုံမှန် spindle-shaped ပုံသဏ္ဍာန်ရှိသော ASCs ၏ကိုယ်စားပြုပုံ။OLYMPUS အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးဖြင့် ရိုက်ကူးသည်။မူရင်းအကျယ်အဝန်း၊ (10x)။B- ASCs ၏ Adipogenic ခြားနားမှုကို Ruthenium အနီရောင် စွန်းထင်းခြင်းမှ သတ္တုဓာတ်ပြုခြင်း၏ ဧရိယာများကို ပြသခြင်းမှ သက်သေပြပါသည်။OLYMPUS အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးဖြင့် ရိုက်ကူးသည်။မူရင်းချဲ့ထွင်မှု (10x)။C- ASCs ၏ Countstar FL လက္ခဏာရပ်။
အနှစ်ချုပ်-
Countstar FL သည် ဤပင်မဆဲလ်များ၏ ထုတ်လုပ်မှုနှင့် ကွဲပြားနေစဉ်အတွင်း အာရုံစူးစိုက်မှု၊ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းနှင့် ဖီနိုအမျိုးအစားလက္ခဏာများ (၎င်းတို့၏ပြောင်းလဲမှုများ) ကို စောင့်ကြည့်နိုင်သည်။FCS express သည် အချက်ပြဆဲလ်တိုင်းကို ပြန်လည်သုံးသပ်ရန်၊ ပုံမှတစ်ဆင့် ဒေတာကို တရားဝင်အောင်ပြုလုပ်ရန် လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။အသုံးပြုသူသည် Countstar Rigel ရလဒ်များအပေါ် အခြေခံ၍ နောက်ထပ်စမ်းသပ်မှုများကို လုပ်ဆောင်ရန်လည်း ယုံကြည်စိတ်ချနိုင်သည်။Countstar Rigel သည် ပင်မဆဲလ်များ၏ အရည်အသွေးကို ထိန်းချုပ်ရန်အတွက် မြန်ဆန်ပြီး ခေတ်မီပြီး ယုံကြည်စိတ်ချရသော နည်းလမ်းကို ပေးဆောင်ပါသည်။
