Heim » Auðlindir » Bein styrkur, lífvænleiki og svipgerðamæling á stofnfrumum með nýrri myndgreiningu frumu

Bein styrkur, lífvænleiki og svipgerðamæling á stofnfrumum með nýrri myndgreiningu frumu

Ágrip: Mesenchymal stofnfrumur eru undirmengi fjölhæfra stofnfrumna sem hægt er að einangra frá mesoderm.Með endurnýjun sjálfafritunar og margstefnuaðgreiningareiginleika búa þeir yfir miklum möguleikum á ýmsum meðferðum í læknisfræði.Mesenchymal stofnfrumur hafa einstaka ónæmissvipgerð og ónæmisstjórnunargetu.Þess vegna eru mesenchymal stofnfrumur nú þegar mikið notaðar við stofnfrumuígræðslu, vefjaverkfræði og líffæraígræðslu.Og fyrir utan þessi forrit eru þau notuð sem tilvalið tæki í vefjaverkfræði sem sáðarfrumur í röð grunn- og klínískra rannsóknatilrauna.Hingað til er ekki til almennt viðurkennd aðferð og staðall fyrir gæðaeftirlit mesenchymal stofnfrumna.Countstar Rigel getur fylgst með styrk, lífvænleika og svipgerðareiginleikum (og breytingum á þeim) meðan á framleiðslu og aðgreiningu þessara stofnfrumna stendur.Countstar Rigel hefur einnig þann kost að fá frekari formfræðilegar upplýsingar, veittar með varanlegum birtusviði og flúrljómunartengdum myndupptökum á öllu ferli frumuvöktunar.Countstar Rigel býður upp á hraðvirka, háþróaða og áreiðanlega aðferð til gæðaeftirlits með stofnfrumum.

Efni og aðferðir:
Fituafleiddar mesenchymal stofnfrumur (AdMSCs) voru gefnar af prófessor Nianmin Qi, AO/PI litunarlausn (Shanghai RuiYu, CF002).Mótefni: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs voru ræktuð í 37 ℃, 5% CO2 rakaðri útungunarvél.Meltið með trypsíni fyrir notkun.
CD merkja litunaraðferð var fylgt sem handbók um mótefni.
CD merkja uppgötvun með Countstar Rigel:
1. Notkunaraðferð fyrir merkjalit var búin til með því að stilla PE rásina á mynd af PE flúrljómun.
2. 3 tún voru tekin úr hverju herbergi.
3. Eftir að myndgreiningu og fyrstu greiningu var lokið var þröskuld (log gate) stilling fyrir jákvæða og neikvæða transfection stillt með FCS hugbúnaði.

Gæðaeftirlit með stofnfrumum
Eftirfarandi mynd (Mynd 1) sýnir aðferðina við stofnfrumumeðferð .

Mynd 1: Aðferð við stofnfrumumeðferð

Niðurstöður:
Ákvörðun um styrk, lífvænleika, þvermál og samsöfnun AdMSCs.
Lífvænleiki AdMSCs var ákvörðuð með AO/PI, tvílita umsóknaraðferð var búin til með því að stilla græna rás og rauða rás á mynd af AO og PI flúrljómun, auk björtu sviði.Dæmi um myndir voru sýndar á mynd 2.

Mynd 2. Myndir af AdMSCs fyrir flutning og eftir flutning.A. Fyrir flutning;sýnd er dæmigerð mynd.B. Eftir flutning;sýnd er dæmigerð mynd.

Hagkvæmni AdMSCs breyttist verulega eftir flutning samanborið við fyrir flutning.Hagkvæmni fyrir flutning var 92%, en hún minnkaði í 71% eftir flutning.Niðurstaðan var sýnd á mynd 3.

Mynd 3. Hagkvæmni niðurstöður AdMSCs (fyrir flutning og eftir flutning)

Þvermál og samsöfnun voru einnig ákvörðuð af Countstar Rigel.Þvermál AdMSCs breyttist verulega eftir flutning samanborið við fyrir flutning.Þvermálið fyrir flutning var 19 µm, en það jókst í 21 µm eftir flutning.Samanlagning fyrir flutning var 20% en jókst í 25% eftir flutning.Frá myndunum sem Countstar Rigel tók, var svipgerð AdMSCs breytt verulega eftir flutning.Niðurstöðurnar voru sýndar á mynd 4.

Mynd 4: Niðurstöður þvermáls og samsöfnunar.A: Dæmigerðum myndum AdMSCs, svipgerð AdMSCs var breytt verulega eftir flutning.B: Samsöfnun fyrir flutning var 20% en jókst í 25% eftir flutning.C: Þvermálið fyrir flutning var 19 µm, en það jókst í 21 µm eftir flutning.

Ákvarða ónæmissvipgerð AdMSCs eftir Countstar Rigel
Ónæmissvipgerð AdMSCs var ákvörðuð með Countstar Rigel, AdMSCs voru ræktuð með mismunandi mótefnum (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Notkunaraðferð fyrir merkjalit var búin til með því að stilla græna rás til að mynda PE flúrljómun, auk bjarts sviðs.Tilvísunarþáttun bjarta sviðsmynda var notuð sem gríma til að sýna PE flúrljómunarmerkið.Niðurstöður CD105 voru sýndar (mynd 5).

Mynd 5: CD105 niðurstöður AdMSCs voru ákvarðaðar af Countstar Rigel.A: Magngreining á jákvæðu hlutfalli CD105 í mismunandi sýnum með FCS express 5 plús hugbúnaði.B: Hágæða myndir veita frekari formfræðilegar upplýsingar.C: Staðfestar niðurstöður með smámyndum af hverri einustu frumu, FCS hugbúnaðarverkfærin skiptu frumunum í mismunandi hópa eftir mismunandi próteintjáningu þeirra.

 

Aðrar mótefnaniðurstöður voru sýndar á mynd 6

Mynd 6: A: Dæmigerð mynd af ASC með dæmigerða snældalaga formgerð.Tekið með OLYMPUS smásjá.Upprunaleg stækkun, (10x).B: Adipogenic aðgreining ASCs sést af Ruthenium Red litun sem sýnir svæði steinefna.Tekið með OLYMPUS smásjá.Upprunaleg stækkun (10x).C: Countstar FL einkenni ASC.

Samantekt:
Countstar FL getur fylgst með styrk, lífvænleika og svipgerðareiginleikum (og breytingum á þeim) meðan á framleiðslu og aðgreiningu þessara stofnfrumna stendur.FCS express veitir aðgerðina til að skoða hverja merkjafrumu, sannreyna gögnin í gegnum myndina.Notandinn getur líka haft sjálfstraust til að framkvæma næstu tilraunir byggðar á niðurstöðum Countstar Rigel.Countstar Rigel býður upp á hraðvirka, háþróaða og áreiðanlega aðferð til gæðaeftirlits með stofnfrumum.

 

Sækja

Skrá niðurhal

  • 这个字段是用于验证目的,应该保持不变。

Persónuvernd þín er mikilvæg fyrir okkur.

Við notum vafrakökur til að auka upplifun þína þegar þú heimsækir vefsíður okkar: afkastakökur sýna okkur hvernig þú notar þessa vefsíðu, hagnýtar vafrakökur muna kjörstillingar þínar og miðunarvafrakökur hjálpa okkur að deila efni sem skiptir þig máli.

Taka

Skrá inn