Abstrakt: Mesenchymale stamsellen binne in subset fan pluripotinte stamsellen dy't isolearre wurde kinne fan 'e mesoderm.Mei har fernijing fan selsreplikaasje en differinsjaasje yn meardere rjochtingen, hawwe se in heech potensjeel foar ferskate terapyen yn medisinen.Mesenchymale stamsellen hawwe in unyk ymmúnfenotype en ymmunregulaasjefermogen.Dêrom wurde mesenchymale stamsellen al in soad brûkt yn stamseltransplantaasjes, weefseltechnyk en orgaantransplantaasje.En Beyond dizze applikaasjes, se wurde brûkt as in ideaal ark yn weefsel engineering as seeder sellen yn in rige fan basis en klinyske ûndersyk eksperiminten.Oant no ta is d'r net in breed akseptearre metoade en standert foar de kwaliteitskontrôle fan mesenchymale stamsellen.De Countstar Rigel kin de konsintraasje, leefberens en fenotype skaaimerken (en har feroaringen) kontrolearje tidens de produksje en differinsjaasje fan dizze stamsellen.De Countstar Rigel hat ek it foardiel yn it krijen fan ekstra morfologyske ynformaasje, fersoarge troch de permaninte helderfjild en fluorescinsje-basearre ôfbylding opnames tidens it hiele proses fan sel kwaliteit monitoring.De Countstar Rigel biedt in rappe, ferfine en betroubere metoade foar de kwaliteitskontrôle fan stamsellen.
Materialen en metoades:
Adipose-ôflaat mesenchymale stamsellen (AdMSC's) waarden bejeftige troch professor Nianmin Qi, AO / PI kleuringsoplossing (Shanghai RuiYu, CF002).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC's waarden yn kultuer brocht yn in 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Digest mei trypsin foar gebrûk.
CD-marker kleuringsproseduere waard folge as de hânlieding fan antykodym.
CD-markerdeteksje mei Countstar Rigel:
1. In sinjaal-kleur applikaasje proseduere waard makke troch it ynstellen fan de PE kanaal foar ôfbylding PE fluorescence.
2. 3 fjilden waarden ferovere út elke keamer.
3. Nei de ôfbylding en de earste analyze wiene foltôge, waard de drompel (log poarte) ynstelling foar positive en negative transfeksje ynsteld troch FCS software.
Kwaliteitskontrôle fan stamsel
De folgjende figuer (figuer 1) toant de proseduere fan stamselterapy .
Ofbylding 1: De proseduere foar stamselterapy
Resultaten:
Bepale de konsintraasje, leefberens, diameter en aggregaasje fan AdMSC's.
De leefberens fan AdMSC's waard bepaald troch AO / PI, In dual-color applikaasje proseduere waard makke troch it ynstellen fan Grien kanaal en Reade kanaal foar ôfbylding AO en PI fluorescence, plus in helder fjild.Foarbyld ôfbyldings waarden werjûn yn figuer 2.
figuer 2. Ofbyldings fan foarôfgeand oan ferfier en nei ferfier fan AdMSCs.A. Foarôfgeand oan ferfier;in represintative ôfbylding wurdt werjûn.B. Nei ferfier;in represintative ôfbylding wurdt werjûn.
De leefberens fan AdMSC's waard drastysk feroare nei ferfier yn ferliking mei foarôfgeand oan ferfier.De leefberens foarôfgeand oan ferfier wie 92%, mar it fermindere nei 71% nei ferfier.It resultaat waard werjûn yn figuer 3.
Ofbylding 3. De leefberensresultaten fan AdMSC's (foardat ferfier en nei ferfier)
De diameter en aggregaasje waarden ek bepaald troch Countstar Rigel.De diameter fan AdMSC's waard drastysk feroare nei ferfier yn ferliking mei foarôfgeand oan ferfier.De diameter foarôfgeand oan ferfier wie 19 µm, mar it fergrutte nei 21 µm nei ferfier.De aggregaasje fan foarôfgeand oan ferfier wie 20%, mar it ferhege nei 25% nei ferfier.Fan 'e ôfbyldings fêstlein troch Countstar Rigel, waard it fenotype fan AdMSC's drastysk feroare nei ferfier.De resultaten waarden werjûn yn figuer 4.
figuer 4: De diameter en aggregation resultaten.A: De represintative bylden fan AdMSC's, it fenotype fan AdMSC's waarden drastysk feroare nei ferfier.B: De aggregaasje foarôfgeand oan ferfier wie 20%, mar it ferhege nei 25% nei ferfier.C: De diameter foarôfgeand oan ferfier wie 19µm, mar it ferhege nei 21µm nei ferfier.
Bepale it immunofenotype fan AdMSC's troch Countstar Rigel
It immunofenotype fan AdMSC's waard bepaald troch Countstar Rigel, AdMSC's waarden respektivelik ynkubeare mei ferskate antykladen (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).In sinjaal-kleur applikaasje proseduere waard makke troch it ynstellen fan in Grien kanaal foar ôfbylding PE fluorescence, plus in helder fjild.Bright fjild ôfbylding referinsje segmentaasje waard tapast as in masker te stekproef de PE fluorescence sinjaal.De resultaten fan CD105 waarden toand (figuer 5).
Ofbylding 5: CD105-resultaten fan AdMSC's waarden bepaald troch Countstar Rigel.A: Kwantitative analyze fan it positive persintaazje fan CD105 yn ferskate samples troch FCS express 5 plus software.B: Ofbyldings fan hege kwaliteit leverje ekstra morfologyske ynformaasje.C: Validearre resultaten troch thumbnails fan elke sel, de FCS-software-ark ferdielde de sellen yn ferskate groepen neffens har wikseljende proteïne-ekspresje.
Oare antykladen resultaten waarden werjûn yn Fig 6
Ofbylding 6: A: In represintatyf byld fan ASC's mei typyske spindelfoarmige morfology.Fongen troch OLYMPUS mikroskoop.Oarspronklik fergrutting, (10x).B: Adipogenyske differinsjaasje fan ASC's wurdt bewiisd troch Ruthenium Red-kleuring dy't gebieten fan mineralisaasje sjen litte.Fongen troch OLYMPUS mikroskoop.Orizjinele fergrutting (10x).C: Countstar FL-karakterisaasje fan ASC's.
Gearfetting:
De Countstar FL kin de konsintraasje, leefberens, en fenotype-kenmerken (en har feroaringen) kontrolearje tidens de produksje en differinsjaasje fan dizze stamsellen.FCS express leveret de funksje om elke sinjaalsel te besjen, de gegevens fia de ôfbylding te falidearjen.De brûker kin ek it fertrouwen hawwe om de folgjende eksperiminten út te fieren basearre op Countstar Rigel-resultaten.De Countstar Rigel biedt in rappe, ferfine en betroubere metoade foar de kwaliteitskontrôle fan stamsellen.
