Kuputuhi: Ko nga pūtau kakau mesenchymal he wahanga o nga pūtau kakau pluripotent ka taea te wehe mai i te mesoderm.Ma o raatau whakahoutanga-a-whaiaro me nga ahuatanga rereke rereke-maha, kei a raatau te kaha nui mo nga momo rongoa rongoa.Ko nga pūtau kakau mesenchymal he tohu tohu mate motuhake me te kaha ki te whakarite aukati.Nō reira, kua whakamahia kētia ngā pūtau kakau mesenchymal i roto i ngā whakawhitinga pūtau kakau, te hangarau kiko, me te whakawhitinga okana.I tua atu i enei tono, ka whakamahia hei taputapu pai mo te miihini kiko hei pūtau seeder i roto i te raupapa o nga whakamatautau rangahau taketake me te haumanu.I tenei wa, kaore he tikanga me te paerewa e whakaaetia ana mo te whakahaere kounga o nga pūtau kakau mesenchymal.Ka taea e te Countstar Rigel te aro turuki i te kukū, te oranga, me nga ahuatanga tohu (me o raatau huringa) i te wa o te hanga me te rereketanga o enei pūtau kakau.He painga ano te Countstar Rigel ki te tiki atu i nga korero morphological, e whakaratohia ana e te maramara tuuturu me nga rekoata whakaahua e ahu mai ana i te fluorescence i roto i nga mahi katoa o te aro turuki i te kounga pūtau.Ka tukuna e te Countstar Rigel tetahi tikanga tere, maamaa, pono hoki mo te whakahaere kounga o nga pūtau kakau.
Nga rauemi me nga tikanga:
Ko nga pūtau kakau mesenchymal i ahu mai i te Adipose (AdMSC).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (Kamupene BD).
I whakatipuhia nga AdMSC i roto i te 37 ℃, 5% CO2 whakamakuku incubator.Kena ki te trypsin i mua i te whakamahi.
I whaihia te tikanga whakapouri tohu CD hei pukapuka mo te antibody.
Te kitenga tohu CD me Countstar Rigel:
1. I hangaia he tikanga tono tohu-tae ma te whakarite i te hongere PE ki te ahua PE fluorescence.
2. E 3 nga mara i tangohia mai i ia ruma.
3. I muri i te whakaotinga o te atahanga me te tātaritanga tuatahi, i whakatauhia te paepae (kuwaha rangitaki) mo te whakawhiti pai me te whakawhiti kino e te rorohiko FCS.
Te whakahaere kounga o te pūtau kakau
Ko te Whakaahua e whai ake nei (Whakaahua 1) e whakaatu ana i te tukanga o rongoā pūtau kakau .
Whakaahua 1: Ko te tikanga mo te whakamaarama i nga pūtau kakau
Hua:
Te whakatau i te kukū, te kaha, te diameter, me te whakahiato o nga AdMSC.
Ko te kaha o nga AdMSC i whakatauhia e AO/PI, I hangaia he tikanga tono tae-rua ma te whakarite i te hongere Kakariki me te hongere Whero ki te ahua AO me te PI fluorescence, me te mara kanapa.I whakaatuhia nga tauira whakaahua i te Whakaahua 2.
Whakaahua 2. Ko nga whakaahua i mua i te kawe me muri i te kawe a AdMSC.A. I mua i te kawe;ka whakaatuhia he ahua kanohi.B. I muri i te kawe;ka whakaatuhia he ahua kanohi.
I tino rerekee te oranga o nga AdMSC i muri i te kawe waka ina whakaritea ki mua i te kawe.Ko te oranga i mua i te kawe he 92%, engari i heke ki te 71% i muri i te kawe.I whakaatuhia te hua i te Whakaahua 3.
Whakaatu 3. Ko nga hua oranga o nga AdMSC (I mua i te kawe me muri i te kawe waka)
Ko te diameter me te whakahiato i whakatauhia e Countstar Rigel.Ko te diameter o nga AdMSC i tino rerekee i muri i te kawe waka ina whakaritea ki mua i te kawe.Ko te diameter i mua i te kawe he 19µm, engari ka piki ki te 21µm i muri i te kawe.Ko te whakahiatotanga o mua i te kawe he 20%, engari i piki ki te 25% i muri i te kawe.Mai i nga whakaahua i hopukina e Countstar Rigel, i tino rerekee te ahua o nga AdMSC i muri i te kawe.I whakaatuhia nga hua i te Whakaahua 4.
Whakaatu 4: Ko te diameter me nga hua whakahiato.A: Ko nga whakaahua o nga AdMSC, te ahua o nga AdMSC i tino rerekee i muri i te kawe.B: Ko te whakahiato i mua i te kawe he 20%, engari i piki ki te 25% i muri i te kawe.C: Ko te diameter i mua i te kawe he 19µm, engari ka piki ki te 21µm i muri i te kawe.
Whakatauhia te immunophenotype o AdMSC na Countstar Rigel
Ko te immunophenotype o AdMSCs i whakatauhia e Countstar Rigel, AdMSCs i incubated ki te antibody rereke (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).I hangaia he tikanga tono tohu-tae ma te whakarite i tetahi hongere Kakariki hei whakaahua i te peerangi PE, me te mara kanapa.Ko te wehewehenga tohutoro pikitia mara kanapa i whakamahia hei kanohi kanohi hei whakatauira i te tohu rewharewha PE.I whakaatuhia nga hua o te CD105 (Whakaahua 5).
Whakaatu 5: Ko nga hua CD105 o AdMSC i whakatauhia e Countstar Rigel.A: Te tātari ine o te ōrau pai o te CD105 i roto i nga tauira rereke na te FCS express 5 me te rorohiko.B: Ko nga whakaahua o te kounga teitei e whakarato ana i etahi atu korero mo te ahua.C: Ko nga hua kua whakamanahia e nga karakōnui o ia pūtau kotahi, ka wehewehea e nga taputapu rorohiko FCS nga pūtau ki nga roopu rereke i runga i o raatau momo korero pūmua.
Ko etahi atu hua paturopi i whakaatuhia i te Whakaahua 6
Whakaahua 6: A: He ahua tohu o nga ASC me te ahua o te ahua o te miro.I mauhia e OLYMPUS microscope.Ko te whakanui taketake, (10x).B: Ko te rereketanga Adipogenic o nga ASC e whakaatuhia ana e te Ruthenium Red staining e whakaatu ana i nga waahi o te kohuke.I mauhia e OLYMPUS microscope.Te whakanui taketake (10x).C: Te tohu a Countstar FL mo nga ASC.
Whakarāpopototanga:
Ka taea e te Countstar FL te aro turuki i te kukū, te oranga, me nga ahuatanga tohu (me o raatau huringa) i te wa o te hanga me te rereketanga o enei pūtau kakau.Ka tukuna e te FCS express te mahi ki te arotake i ia pūtau tohu, whakamana i nga raraunga ma te ahua.Ka taea hoki e te kaiwhakamahi te maia ki te kawe i nga whakamatautau e whai ake nei i runga i nga hua a Countstar Rigel.Ka tukuna e te Countstar Rigel tetahi tikanga tere, maamaa, pono hoki mo te whakahaere kounga o nga pūtau kakau.
