Abstrak: Sel punca mesenkim adalah bagian dari sel punca pluripoten yang dapat diisolasi dari mesoderm.Dengan pembaruan diri dan karakteristik diferensiasi multi-arah, mereka memiliki potensi tinggi untuk berbagai terapi dalam kedokteran.Sel punca mesenkim memiliki fenotipe imun yang unik dan kemampuan regulasi imun.Oleh karena itu, sel punca mesenkim sudah banyak digunakan dalam transplantasi sel punca, rekayasa jaringan, dan transplantasi organ.Dan Di luar aplikasi ini, mereka digunakan sebagai alat yang ideal dalam rekayasa jaringan sebagai sel seeder dalam serangkaian eksperimen penelitian dasar dan klinis.Sampai saat ini, tidak ada metode dan standar yang diterima secara luas untuk pengendalian kualitas sel punca mesenkim.Countstar Rigel dapat memantau konsentrasi, viabilitas, dan karakteristik fenotipe (dan perubahannya) selama produksi dan diferensiasi sel induk ini.Countstar Rigel juga memiliki keunggulan dalam memperoleh informasi morfologi tambahan, yang disediakan oleh rekaman gambar berbasis fluoresensi dan medan terang permanen selama seluruh proses pemantauan kualitas sel.Countstar Rigel menawarkan metode yang cepat, canggih, dan andal untuk kontrol kualitas sel punca.
Bahan dan metode:
Sel punca mesenkimal turunan adiposa (AdMSCs) diberikan oleh Profesor Nianmin Qi, larutan pewarnaan AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antibodi: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (Perusahaan BD).
AdMSC dikultur dalam inkubator yang dilembabkan dengan 37℃, 5% CO2.Mencerna dengan tripsin sebelum digunakan.
Prosedur pewarnaan penanda CD diikuti sebagai manual antibodi.
Deteksi penanda CD dengan Countstar Rigel:
1. Prosedur aplikasi warna sinyal dibuat dengan mengatur saluran PE ke gambar fluoresensi PE.
2. 3 bidang diambil dari setiap ruang.
3. Setelah pencitraan dan analisis awal selesai, pengaturan ambang (gerbang log) untuk transfeksi positif dan negatif ditetapkan oleh perangkat lunak FCS.
Kontrol kualitas sel induk
Gambar berikut (Gambar 1) menunjukkan prosedur dari terapi sel induk .
Gambar 1: Prosedur terapi sel induk
Hasil:
Menentukan konsentrasi, viabilitas, diameter, dan agregasi AdMSCs.
Kelangsungan AdMSCs ditentukan oleh AO/PI, Prosedur aplikasi dua warna dibuat dengan menyetel saluran Hijau dan saluran Merah ke gambar fluoresensi AO dan PI, ditambah bidang terang.Contoh gambar ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Gambar sebelum transportasi dan setelah transportasi AdMSCs.A. Sebelum diangkut;gambar yang representatif ditampilkan.B. Setelah transportasi;gambar yang representatif ditampilkan.
Kelangsungan hidup AdMSC berubah drastis setelah transportasi jika dibandingkan dengan sebelum transportasi.Viabilitas sebelum transportasi adalah 92%, tetapi berkurang menjadi 71% setelah transportasi.Hasilnya ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3. Hasil viabilitas AdMSCs (Sebelum transportasi dan setelah transportasi)
Diameter dan agregasi juga ditentukan oleh Countstar Rigel.Diameter AdMSC berubah drastis setelah transportasi dibandingkan dengan sebelum transportasi.Diameter sebelum transportasi adalah 19µm, tetapi meningkat menjadi 21µm setelah transportasi.Agregasi sebelum transportasi adalah 20%, tetapi meningkat menjadi 25% setelah transportasi.Dari gambar yang diambil oleh Countstar Rigel, fenotipe AdMSC berubah secara drastis setelah transportasi.Hasilnya ditunjukkan pada Gambar 4.
Gambar 4: Hasil diameter dan agregasi.J: Gambar representatif AdMSC, fenotipe AdMSC berubah drastis setelah transportasi.B: Agregasi sebelum transportasi adalah 20%, tetapi meningkat menjadi 25% setelah transportasi.C: Diameter sebelum pengangkutan adalah 19µm, tetapi meningkat menjadi 21µm setelah pengangkutan.
Tentukan imunofenotipe AdMSCs oleh Countstar Rigel
Imunofenotipe AdMSCs ditentukan oleh Countstar Rigel, AdMSCs masing-masing diinkubasi dengan antibodi yang berbeda (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Prosedur aplikasi warna sinyal dibuat dengan menyetel saluran Hijau ke gambar fluoresensi PE, ditambah bidang terang.Segmentasi referensi gambar bidang terang diterapkan sebagai topeng untuk mengambil sampel sinyal fluoresensi PE.Hasil CD105 ditunjukkan (Gambar 5).
Gambar 5: Hasil CD105 dari AdMSC ditentukan oleh Countstar Rigel.J: Analisis kuantitatif persentase positif CD105 dalam sampel yang berbeda oleh perangkat lunak FCS express 5 plus.B: Gambar berkualitas tinggi memberikan informasi morfologi tambahan.C: Hasil yang divalidasi dengan thumbnail dari setiap sel, perangkat lunak FCS membagi sel ke dalam kelompok yang berbeda sesuai dengan ekspresi protein yang bervariasi.
Hasil antibodi lainnya ditunjukkan pada Gambar 6
Gambar 6: A: Gambar representatif ASC dengan morfologi khas berbentuk gelendong.Ditangkap oleh mikroskop OLYMPUS.Perbesaran asli, (10x).B: Diferensiasi adipogenik ASC dibuktikan dengan pewarnaan Rutenium Red yang menunjukkan area mineralisasi.Ditangkap oleh mikroskop OLYMPUS.Perbesaran asli (10x).C: Karakterisasi FL Countstar dari ASC.
Ringkasan:
FL Countstar dapat memantau konsentrasi, viabilitas, dan karakteristik fenotipe (dan perubahannya) selama produksi dan diferensiasi sel induk ini.FCS express menyediakan fungsi untuk meninjau setiap sel sinyal, memvalidasi data melalui gambar.Pengguna juga dapat memiliki kepercayaan diri untuk melakukan eksperimen berikutnya berdasarkan hasil Countstar Rigel.Countstar Rigel menawarkan metode yang cepat, canggih, dan andal untuk kontrol kualitas sel punca.
